免疫缺陷鼠注射car-t后取血流式抗体染色检测的方法

菜鸟

用免疫缺陷鼠造模，小鼠注射car-t细胞后一周取血检测小鼠体内car-t细胞，检测方法是染抗体用流式细胞仪检测。想问一下取血后怎么进行抗体染色？

niwanmao

不知道你的目的是检测什么指标？也不知道你的检测方案如何。
抗体染色如果做胞膜的，很简单，先加抗体，再加血，然后孵育15分钟后，裂解10分钟，最后离心去上清，上机检测。

ghqiu09

你的car-t细胞是不是应该带绿色荧光啊？如果是直接圈第一通道阳性的不就可以了？

菜鸟

niwanmao 发表于 2017-6-27 14:36
不知道你的目的是检测什么指标？也不知道你的检测方案如何。
抗体染色如果做胞膜的，很简单，先加抗体，再 ...

是检测小鼠血液中CD3门内car-t细胞的阳性率。您说的方法是小鼠取血后加scfv的抗体，孵育15分钟，加红细胞裂解液，裂解10min，离心去上清，就可以直接上机检测。
我们现在的方法是先裂解离心去上清，在加抗体孵育20min上机检测，检测不到阳性的car-t细胞。
我们的方法存在问题吗？

菜鸟

是检测小鼠血液中CD3门内car-t细胞的阳性率。您说的方法是小鼠取血后加scfv的抗体，孵育15分钟，加红细胞裂解液，裂解10min，离心去上清，就可以直接上机检测。
我们现在的方法是先裂解离心去上清，在加抗体孵育20min上机检测，检测不到阳性的car-t细胞。
我们的方法存在问题吗？
@niwanmao

niwanmao

菜鸟 发表于 2017-6-28 16:00
是检测小鼠血液中CD3门内car-t细胞的阳性率。您说的方法是小鼠取血后加scfv的抗体，孵育15分钟，加红细胞 ...

建议你这样：
1、用Fc Blocker先阻断。
2、标记抗体。
3、裂解。

菜鸟

niwanmao 发表于 2017-6-28 19:50
建议你这样：
1、用Fc Blocker先阻断。
2、标记抗体。

Fc Blocker阻断的意义的在哪？

niwanmao

菜鸟 发表于 2017-6-30 10:59
Fc Blocker阻断的意义的在哪？

一些高表达CD16等抗原（不仅仅CD16）的细胞，表面存在较多结合抗体Fc段的受体，所以无论什么抗体，它可能都会发生非特异性结合，所以阻断后，就能够更真实地反映抗体结合基础水平。