细胞破膜前后的选择

fitlao · 发表于 2017-8-18 08:56:19

现在做的是与B细胞亚群相关的实验。因为配色、机器通道的原因，平时做实验时会把一个样本分成几组不同配色来染色。有的只染表面，有的破膜染胞内。我的问题是用CD19圈门B细胞，只染表面与破膜后B细胞的比例有较明显差异（比如染表面时B占5%，破膜的B可能占9-10%），我在后面统计的时候是选只染表面的B细胞比例，还是破膜后的？
我咨询过我师姐，师姐告诉我只要自己实验前后统一就可以。就是说统计时要么都用没破膜的，要么使用破膜的结果，可以自己选择。我有点疑惑，这个有没有标准的方法或规定？
而且我在“生物学霸”上一篇文章看到 “ 避免打孔剂对细胞形态的影响从而影响后续圈门影响实验结果，所以不管是否需要胞内染色，每个样本都需要打孔。”有这个必要吗？

niwanmao · 发表于 2017-8-18 08:56:20

以表面染色为准，但需要正确排除掉碎片、粘连体等。

fitlao · 发表于 2017-8-20 10:48:47

niwanmao 发表于 2017-8-18 19:17
以表面染色为准，但需要正确排除掉碎片、粘连体等。

谢谢，@niwanmao 老师。能进一步解释下原因吗？是有规定或者有文献，还是大家习惯这样做？或者说用破膜后的也可以？

niwanmao · 发表于 2017-8-20 22:36:43

fitlao 发表于 2017-8-20 10:48
谢谢，@niwanmao 老师。能进一步解释下原因吗？是有规定或者有文献，还是大家习惯这样做？或者说用破膜后 ...

没有规定，还是一个默认的共识问题

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