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楼主: Helen_ztt

[凋亡检测] 为什么我的样品组只看到凋亡细胞,没有活细胞???

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发表于 2017-10-22 14:16:43 | 显示全部楼层
Helen_ztt 发表于 2017-10-21 18:10
我错了,倪老师,你回答我那篇帖子的时候,我们已经试多聚甲醛了……我们一定改回正规的阳性对照!
不过 ...

样本组本身就存在一定的非特异性荧光,出现漂移才是正常的,尤其是组织细胞,经过处理后,更容易出现非特异性结合。而且,之前站内很多帖子都反复强调过,空白对照只是用于大致了解电压设置范围,不能用来设门,不能用来设门,不能用来设门。
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 楼主| 发表于 2017-10-22 21:38:22 | 显示全部楼层
本帖最后由 Helen_ztt 于 2017-10-22 21:42 编辑
niwanmao 发表于 2017-10-22 14:16
样本组本身就存在一定的非特异性荧光,出现漂移才是正常的,尤其是组织细胞,经过处理后,更容易出现非特 ...

哦哦,我明白了!不过,荧光值达到多少才算阳性,而不是非特异呢?还有我们还做了另一种细胞的7AAD-APC染色,H2O2 200uM 24h处理,没有看到像这个样品组的漂移,活细胞位置跟空细胞的位置差不多,APC染色有一点,很少,没有跟活细胞分得开,如下图1是帖子里我贴的那种样品组,图2是另一种细胞。两种细胞都是肿瘤细胞系。
倪老师,会不会有这种漂移是因为细胞不同吗?还是因为对细胞的处理方式不同造成的?还有您看我们的试剂盒会不会是有问题?


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发表于 2017-10-24 13:48:53 | 显示全部楼层
Helen_ztt 发表于 2017-10-22 21:38
哦哦,我明白了!不过,荧光值达到多少才算阳性,而不是非特异呢?还有我们还做了另一种细胞的7AAD-APC染 ...

造成荧光信号漂移的原因很多,但是无论如何漂移,只要你用的AV/PI是质量过关的,都是很好能够分群的。
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 楼主| 发表于 2017-10-25 16:27:31 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2017-10-24 13:48
造成荧光信号漂移的原因很多,但是无论如何漂移,只要你用的AV/PI是质量过关的,都是很好能够分群的。 ...

明白了,谢谢倪老师!
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