细胞凋亡圈门问题

stzrj

向各位老师请教一个流式检测细胞凋亡的问题，第一次做流式，有点疑惑，而且用的是C6的机器，有点奇怪，望老师指教1. 圈门的时候单染对照和不加染料的对照有什么用？直接圈双染的对照不可以吗？
2. 在圈的时候，是否圈左下角的细胞团就可以了?
谢谢老师！

ghqiu09

stzrj 发表于 2017-11-1 13:05
这是食管癌的细胞
那么应该圈在哪里呢？能否指教一下？因为感觉没有其他团块可以圈了 ...

癌细胞一般偏大，c6的仪器圈PBMC的时候一般在400万的位置，癌细胞要比这个大，所以我觉得是后面那一团细胞。还有C6很不好的地方就是调不了电压的。收集完成之后flowjo是调不了电压的，最多就是调补偿。

ghqiu09

双染一般就是你的样品，单染一般是为了调节补偿，都不染的为了调节电压，为了让细胞跑到合适的位置。你第二张图圈门应该错了，那部分应该都是碎片之类的。顺便问一下，你这是什么细胞？

chymanhz

你的停止条件是什么，图二我觉得你可能圈了碎片，是不是阈值设的太低了

stzrj

chymanhz 发表于 2017-11-1 11:49
你的停止条件是什么，图二我觉得你可能圈了碎片，是不是阈值设的太低了

10000个细胞 会不会太少

stzrj

ghqiu09 发表于 2017-11-1 11:38
双染一般就是你的样品，单染一般是为了调节补偿，都不染的为了调节电压，为了让细胞跑到合适的位置。你第二 ...

这是食管癌的细胞
那么应该圈在哪里呢？能否指教一下？因为感觉没有其他团块可以圈了

stzrj

ghqiu09 发表于 2017-11-1 11:38
双染一般就是你的样品，单染一般是为了调节补偿，都不染的为了调节电压，为了让细胞跑到合适的位置。你第二 ...

请问flowjo要如何根据单染和都不染来调节电压呢？有相关教程吗？谢谢你

ghqiu09

stzrj 发表于 2017-11-1 13:03
10000个细胞 会不会太少

收集的细胞个数并没有直接的绝对数，而是需要看你分析的细胞的比例，假设目的细胞比例只有1%，1万个肯定少了，但是如果有50%，那就足够了。不过，1万个点我说的是门内的点数，而不是ungated

stzrj

ghqiu09 发表于 2017-11-2 08:42
收集的细胞个数并没有直接的绝对数，而是需要看你分析的细胞的比例，假设目的细胞比例只有1%，1万个肯定 ...

非常感谢你！最后问一下我这个百分之八十的细胞都在左下角成了碎片是什么原因呢？是不是加药处理太久了？还是吹打的时候被我吹死了？

ghqiu09

stzrj 发表于 2017-11-2 09:33
非常感谢你！最后问一下我这个百分之八十的细胞都在左下角成了碎片是什么原因呢？是不是加药处理太久了？ ...

你这是组织的样品过滤网的吗？过滤网后就吹匀了就行。加药处理久了有可能也导致了细胞死亡（看看你的对照细胞会不会也这样），收集细胞前，你可以镜下先看看细胞的状态。