凋亡调补偿，空白与PI单染没有差别怎么办？

liushi666

求助各位大神，在调补偿的时候空白与PI单染没有区别，该怎么办？可能是什么原因？
用的是Annexin-V和PI的方法。

图1是空白组，没有染色。出现明显的两团细胞。图2是同样是空白组
图3是PI单染。

loisen

liushi666 发表于 2017-11-22 22:06
上述情况的可能有两种：
1.试剂有问题？
2.细胞都是活的，没有透膜处理，所以都无法染上PI？

你的细胞明显不都是活的。左边那一群是凋亡或坏死的。换个试剂再试试吧。

niwanmao

首先，细胞本身状态有问题，左侧这群属于坏死或凋亡的细胞，只有右侧小堆活细胞。
其次，PI没染上，这说明要么染色步骤问题，要么试剂问题。

如果有兴趣，可以试试咱们流式中文网推出的新服务，互联网科研流式检测服务（申请——合同拟定和开发票——快递样本——实验结果获取，简单四步完成科研）：https://www.jiandaoyun.com/f/5a156a757f1df609a90c18b6

liushi666

niwanmao 发表于 2017-11-22 21:25
首先，细胞本身状态有问题，左侧这群属于坏死或凋亡的细胞，只有右侧小堆活细胞。
其次，AV和PI都没有染上 ...

您是怎么判断出FITC没有染上的呢？

niwanmao

liushi666 发表于 2017-11-22 21:29
您是怎么判断出FITC没有染上的呢？

是PI

loisen

PI单染，如果是用calibur上机，应该在FL2通道吧？（488/585）

liushi666

niwanmao 发表于 2017-11-22 21:36
是PI

不好意思，我看错了。刚看到前面一个帖子里一个老师提到可能是染色前没有吸尽PBS，实验中确实有这个问题，不知是否是这个原因。下次实验注意下这个细节。
谢谢倪老师的解答！

liushi666

loisen 发表于 2017-11-22 21:49
PI单染，如果是用calibur上机，应该在FL2通道吧？（488/585）

感谢您的回复。
用的是C6。

loisen

liushi666 发表于 2017-11-22 21:53
感谢您的回复。
用的是C6。

您可以查一下C6的设置，PI一般是和PE同一通道，也是在FL2.还有，PBS没有吸尽可能影响annexin v的结合。对PI影响应该不大吧。

liushi666

loisen 发表于 2017-11-22 22:00
您可以查一下C6的设置，PI一般是和PE同一通道，也是在FL2.还有，PBS没有吸尽可能影响annexin v的结合。对 ...

上述情况的可能有两种：
1.试剂有问题？
2.细胞都是活的，没有透膜处理，所以都无法染上PI？

还会有别的原因不？