“测定不同时相膜蛋白比例”
（1）加入连接荧光的抗体到细胞中使其与膜蛋白结合后，PBS洗去未结合的抗体(防止之后的破膜操作使抗体与膜内蛋白结合），用4%多聚甲醛固定细胞30分钟（一是为了使细胞停止在所处的时相，不再进行有丝分裂，二是为了防止破膜染核时膜蛋白离开原本的细胞，影响某一时相膜蛋白量），用”细胞周期检测试剂盒“中的RNase37度水浴孵30分钟，再用PI染液（据试剂商说，里面已经含有破膜成分）4度孵育30分钟，上机器检测
（2）膜蛋白与抗体结合后，4%多聚甲醛固定30分钟，37度DAPI染核。
很明显，DAPI染核操作更简便，也免去了我的担忧（害怕破膜会使膜蛋白从原本的细胞膜表面离去），有不少文献表明DAPI染核用流式测细胞周期是可行的，但一直以来PI更为常用，我们这边流式老师否决了我用DAPI做流式，说是原理不同（我表示很迷茫呀，一点都没有倪老师的耐心 ）还有就是我们这边的紫外激光是405 nm,DAPI激发光是355nm,有些偏差 |
发表于 2017-11-29 14:01:36
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