固定对细胞膜表面蛋白影响

niwanmao

guanyu 发表于 2017-12-1 08:58
同时还要做不同时相载体的摄取量，为防止固定使得已摄取的载体吐出，因此选用4%多聚甲醛，不打算用其他方 ...

一般我们用1％终浓度，固定5分钟以上就有效。

zzf123

niwanmao 发表于 2017-11-26 17:43
你要检测的膜蛋白是否会受固定、破膜影响，可以先对比测试一下看看就知道了，一般应该没你想象的这么严重。 ...

倪老师，您好！我有个固定后透膜染色的问题。
我用的是ebioscience的Fixation/permeabilization试剂盒，先固定细胞，然后透膜染色。我要测的蛋白在胞内、膜上都有，那么这样固定后透膜染色，是染到所有（胞内膜上都包括）蛋白，还是只会染到细胞内部的蛋白分子呢？

niwanmao

zzf123 发表于 2019-1-4 17:18
倪老师，您好！我有个固定后透膜染色的问题。
我用的是ebioscience的Fixation/permeabilization试剂盒， ...

会染上所有位置的蛋白分子。

如果对于胞内胞膜都存在的分子，想特异性标记胞内的，可以试试先用大量无荧光素的抗体标记胞膜分子（等于是封闭），充分洗涤后进行固定、破膜，然后标记胞内

zzf123

niwanmao 发表于 2019-1-5 08:23
会染上所有位置的蛋白分子。

如果对于胞内胞膜都存在的分子，想特异性标记胞内的，可以试试先用大量无荧 ...

好的！多谢老师！那么您说的“用大量无荧光素标记的抗体”有什么要求吗，需要用针对我要测的蛋白分子特异性抗体吗？

niwanmao

zzf123 发表于 2019-1-6 11:41
好的！多谢老师！那么您说的“用大量无荧光素标记的抗体”有什么要求吗，需要用针对我要测的蛋白分子特异 ...

跟你使用的检测抗体同一个克隆号，但是没有荧光素标记

zzf123

niwanmao 发表于 2019-1-6 12:17
跟你使用的检测抗体同一个克隆号，但是没有荧光素标记

明白了！谢谢老师！！！