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[视频] 多色方案搭配和优化实战

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发表于 2017-11-28 18:00:15 | 显示全部楼层 |阅读模式

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上周末广州聚会,站友提到最多的问题就是多色搭配和CFSE增殖,其中几位研究生站友在多色方案搭配上的优化也是令人眼前一亮。
好的话题,讲得再多,也不会有人嫌烦的,所以就从油×管上,把11月上旬Bio-Rad公司放出来的多色方案搭配和优化的一个实例视频转过来,与FLOWER们分享。在视频之前,我们先来简要介绍一下视频的内容,方便大家观看视频。

视频主要讲述的是NK和NKT免疫细胞检测多色方案的搭配和优化。

1、多色方案的关键因素:仪器、可用荧光素、荧光素亮度、抗原在细胞上的表达强度、荧光素之间的补偿情况:
屏幕快照 2017-11-28 下午5.24.34.png


2、NK和NKT方案的抗体组成,此时只关注表型和分群:
屏幕快照 2017-11-28 下午5.24.47.png


3、先进行尝试性搭配方案1,荧光素组成如下:
屏幕快照 2017-11-28 下午5.25.17.png


4、用方案1的分析结果如下,可见CD16和CD56的分群均不太好:
屏幕快照 2017-11-28 下午5.25.32.png


5、对荧光素亮度进行探索,发现CD56 PE最强:
屏幕快照 2017-11-28 下午5.25.58.png


6、再用相同标记,探索不同抗原在细胞表面的表达量:
屏幕快照 2017-11-28 下午5.26.54.png


7、对方案1进行调整优化,形成如下的方案2:
屏幕快照 2017-11-28 下午5.28.01.png


8、方案2的分析结果如下,CD8的分群欠佳:
屏幕快照 2017-11-28 下午5.28.18.png

9、寻找原因,发现是由于Dump通道的A647荧光对CD8 A700荧光的干扰,两者之间的补偿即使调整到位,也是形成鱼尾状扩散(SE大):
屏幕快照 2017-11-28 下午5.40.31.png


10、于是再次对方案进行微调,将CD8 改成PB标记,形成方案3:
屏幕快照 2017-11-28 下午5.41.45.png


11、最后的方案3检测结果如下,结果较为理想:
屏幕快照 2017-11-28 下午5.42.09.png


下面看视频吧:


发表于 2017-12-8 07:39:47 | 显示全部楼层
我最近也在做流式每次实验都要设置一个阴性对照  调节各个通道电压  用于确定阴阳性界线电压设定好以后一般来说是不能再动了 那我单染的用于补偿调节的样品怎么调补偿  是把单染的样品读一下之后  再调吗  调补偿的时候不能动电压对吧  因为补偿不也是根据图来调吗  就是具体应该在哪里调不是很清楚  非常感谢你的回复  我用的流式是BD FACSverse的
发表于 2017-12-14 11:16:14 | 显示全部楼层
没用过 FACSuite软件
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