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[标本处理] FITC/PI凋亡检测左上方细胞数目太多怎么办

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发表于 2017-11-30 15:25:42 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
用的机子是BD Accuri C6,做的是贴壁细胞,可能吹打的比较用力,凡是药物处理组左上方均或多或少有一定比例的细胞,请问:这种情况发文章的时候有问题吗?这样可以通过调节补偿什么的改善吗?第一次做凋亡,圈门补偿也是自己调的,也不知道对不对,求大神也帮忙看一下!

阴性对照散点.png
FITC单阳.png
PI单阳.png
Plot_B03_53439.png
药物一.png
药物二.png
药物三.png
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 楼主| 发表于 2017-11-30 15:26:32 | 显示全部楼层
第四幅图是 对照组。。
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发表于 2017-11-30 21:45:47 | 显示全部楼层
落花微雨 发表于 2017-11-30 15:26
第四幅图是 对照组。。

我认为可以按照这个方式设门。

2017-11-30_214346.gif
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 楼主| 发表于 2017-12-4 10:24:08 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2017-11-30 21:45
我认为可以按照这个方式设门。

老师,您的意思是门都往上平移一下对吧,那么我对照组就离门那条水平线太远了,这样也可以吗?流式小白,多谢老师解答
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发表于 2017-12-4 16:52:17 | 显示全部楼层
几点:
1. 看上去你的细胞自发荧光很厉害,是否考虑将FITC-Annexin V换成APC标记的,用FL2和FL4进行检测。
2. 你的FL2-FL1和FL1-FL2补偿显然都调太高了。你是把自发荧光的那群细胞(本来是斜的)硬生生压平了。
3. 还有一个问题,你的药是否有荧光?
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 楼主| 发表于 2017-12-4 21:53:39 | 显示全部楼层
miliamlau 发表于 2017-12-4 16:52
几点:
1. 看上去你的细胞自发荧光很厉害,是否考虑将FITC-Annexin V换成APC标记的,用FL2和FL4进行检测。
...

老师您好,我的细胞和药都没有荧光,我的单阳补偿都只调了5%,我也不知道为什么PI染色的那么强,导致整个图片看上去特别靠上。流式小白,多谢老师解答。
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发表于 2017-12-4 22:35:32 | 显示全部楼层
这个是什么细胞?我经常碰到跟你差不多的情况。
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 楼主| 发表于 2017-12-5 17:05:57 | 显示全部楼层
miliamlau 发表于 2017-12-4 22:35
这个是什么细胞?我经常碰到跟你差不多的情况。

老师,这个细胞是A549
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发表于 2017-12-21 09:25:18 | 显示全部楼层
习惯于FSC-SSC的细胞群处于对角线,也就是你需要把SSC电压调高一些。同时,control(未加药物,双染)调节电压,使其位于左下角(可点击Grid,使其位于16格的最左下格),这样方便画十字门。
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 楼主| 发表于 2017-12-22 15:05:34 | 显示全部楼层
名字真不好 发表于 2017-12-21 09:25
习惯于FSC-SSC的细胞群处于对角线,也就是你需要把SSC电压调高一些。同时,control(未加药物,双染)调节 ...

老师,我用的BD的机子,没法调电压
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