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你会用裂解液吗?

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发表于 2017-12-6 20:49:16 | 显示全部楼层 |阅读模式

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对骨髓、外周血、脾脏等样本进行流式免疫分型时,裂解红细胞是必须要做的。减少或消除红细胞(RBCs)后,可以使白细胞更容易分析,而且获取也更容易,不会因为阈值的设置导致淋巴细胞被部分排除掉。

不过,RBC裂解对免疫分型也会存在一些影响,例如可能使细胞丢失、侧向散射(SSC)和前向散射(FSC)的变化、影响抗体染色效果等等。因此,选择最适合您的仪器、实验的裂解液,并在内部验证至关重要。

今天来对比一下不同的裂解方法和试剂,讨论影响结果的因素,为大家提供一些参考。

目前最常用的裂解方法有两类:大体积裂解(裂解/染色/洗涤)、管内裂解(染色/裂解/洗涤)。两种裂解方法的优缺点如下。
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此文的目的并不是评估哪种裂解液好,哪种坏,大家在平时使用时,要根据自己的实验进行客观选择,避免对自己检测指标有影响的,选择对检测指标有利的裂解液。

参考文献:
Lysing Methods and Reagents for Flow cytometric Immunophenotyping.  By Melanie O’Donahue and Laura Johnson.

发表于 2017-12-7 12:44:13 | 显示全部楼层
文献没找到,请问能给个链接吗?
发表于 2017-12-11 15:32:49 | 显示全部楼层
用甲醛固定之前通过7aad来区分死活细胞在血里,靠谱吗?
发表于 2017-12-11 21:35:59 | 显示全部楼层
damaiyawo 发表于 2017-12-11 15:32
用甲醛固定之前通过7aad来区分死活细胞在血里,靠谱吗?

个人觉的不合适,最好使用专门的标记试剂,如EMA 美天旎的VIOability染料,还有thermo的dead/live cell试剂
发表于 2017-12-11 21:36:36 | 显示全部楼层
damaiyawo 发表于 2017-12-11 15:32
用甲醛固定之前通过7aad来区分死活细胞在血里,靠谱吗?

个人觉的不合适,最好使用专门的标记试剂
发表于 2017-12-12 09:22:50 | 显示全部楼层
烟雨任平生 发表于 2017-12-11 21:36
个人觉的不合适,最好使用专门的标记试剂

谢谢,之前有的老师这样标记前来检测,可是每次的结果都不太一样,有的时候活细胞是7aad阴性的有的时候是阳性的
 楼主| 发表于 2017-12-12 12:11:52 | 显示全部楼层
damaiyawo 发表于 2017-12-12 09:22
谢谢,之前有的老师这样标记前来检测,可是每次的结果都不太一样,有的时候活细胞是7aad阴性的有的时候是 ...

先染7-AAD,再用甲醛的话,理论是可以,但时间不能太久,时间过长容易导致假阳性。
发表于 2018-2-6 09:29:23 | 显示全部楼层
受教了~谢谢
发表于 2018-2-8 13:25:03 | 显示全部楼层
好文,希望马上能看,最近就能用到
发表于 2018-2-11 12:37:16 | 显示全部楼层
什么时候积分才能55以上啊?门槛是不是太高了啊。。。
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