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[其它临床检测] 收获成熟DC是要把细胞吹下来吗?

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发表于 2018-4-11 21:29:36 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
收获成熟DC是要把细胞吹下来吗?还是消化下来?  谢谢

发表于 2018-4-12 14:28:42 | 显示全部楼层
2012年的一篇文章对你会有帮助:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4559332/
节选如下:
1、After the 7-day culture period, harvest DCs by firmly tapping the flasks with the palm of your hand. This will dislodge the loosely adherent DC clusters. Harvest the DCs into a 50 ml conical tube and maintain the cells on ice.
2、Wash the adherent DCs with cold PBS and collect the PBS wash in 50 ml conical tubes.
3、Add 20 ml of enzyme free dissociation buffer to each T-150 tissue culture flask and incubate at 37°C for 15–20 minutes.
4、Harvest all DCs by firmly tapping the flasks with the palm of your hand followed by vigorous pipetting. Harvest all cells and combine them with previously harvested DCs.
5、Centrifuge all tubes at 300 × g for 10 minutes at 4°C.
 楼主| 发表于 2018-4-13 23:09:57 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2018-4-12 14:28
2012年的一篇文章对你会有帮助:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4559332/
节选如下:
1、Af ...

有一个做DC的专利,所用的标志物都是直方图,专利上面是:DC诱导前后各种成熟标志物表达差异巨大。诱导以后,CD80,CD83,CD86的阳性表达都是93%以上。  我完全按照专利的做法重复这个实验,我用的是多色荧光一起染色,我做出来的结果是DC都是CD11c+CD123+双阳性,在此基础上看到CD80+CD86+双阳性的细胞为0%。   我同时用我自己的方法作为对照,我做出来的DC绝大多数是明显有CD80+CD86+双阳性细胞的。   难道用单染看DC是否成熟不靠谱?
发表于 2018-4-14 09:55:29 | 显示全部楼层
cellprobe 发表于 2018-4-13 23:09
有一个做DC的专利,所用的标志物都是直方图,专利上面是:DC诱导前后各种成熟标志物表达差异巨大。诱导以 ...

专业做流式的人,绝大多数情况下,应该尽量避免用直方图看抗原表达率。
 楼主| 发表于 2018-4-14 11:50:44 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2018-4-14 09:55
专业做流式的人,绝大多数情况下,应该尽量避免用直方图看抗原表达率。 ...

我怀疑他们收集到的很多细胞不是DC。CD80,CD83,CD86,HLA-DR,没有一个单一的分子是DC特有的。
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