流式新用处——慢性萎缩性胃炎

niwanmao

慢性萎缩性胃炎是幽门螺杆菌感染和自身免疫性胃炎常见的并发症，而同时，慢性萎缩性胃炎是发生胃癌的主要危险因素，这是全球癌症相关死亡的第三大常见原因。 组织病理学显微技术在几种小鼠模型中已经很好地研究了胃癌发展的病理生理学，是分析胃上皮组织病理变化进展的标准技术，但无法在器官层面对上皮细胞进行具有统计学意义的检测，此时，能够高通量检测单个上皮细胞蛋白质表达的流式细胞术就成了理想的选择。

Bockerstett等人在2018年4月6日的Int J Mol Sci杂志上发表了一篇用流式检测胃上皮细胞和浸润免疫细胞重要蛋白标记的文章，值得我们参考。

胃腺体单细胞分离方法
文章采用了BALB/c作为对照组、TxA23小鼠作为实验组（自身免疫性慢性萎缩性胃炎模型小鼠）。将整个胃体与前胃、食管分开，并在37℃下在胶原酶（10mg/mL）中以600rpm搅拌30分钟。消化后，将剩余的胃浆膜和结缔组织从腺体中去除，用用含青霉素-链霉素、庆大霉素和0.5mM 1,4-二硫苏糖醇（DTT)的DMEM/F12，50×g离心10分钟洗涤两次。然后用Dispase II在37℃以600rpm搅拌90分钟，将腺体消化成单细胞。 最后，用含20mM EDTA的流式细胞术染色缓冲液将单个细胞洗涤两次，用台盼蓝拒染计数活细胞。

抗体标记方案
不复杂，CD45、EpCAM、CD45.1、MHC-I、MHC-II、7-AAD

分析
胃上皮细胞分析，根据FSC/SSC排除碎片、FSC-A/FSC-H排除粘连体、通过7-AAD排除死细胞，接着圈出EpCAM＋的上皮细胞和CD45＋的免疫细胞，从下面的B图可见，BALC/c小鼠上皮细胞88.8％、免疫细胞几乎缺如，而TxA23模型小鼠出现6％的免疫细胞浸润。C图用免疫荧光观察，绿色为壁细胞特异性标记Dolichous bifluorous agglutinin（DBA），红色为EpCAM上皮标记，可见部分为壁细胞，在D图的流式检测上也可明显看到胃上皮细胞中20.6％为壁细胞（DBA＋）。



进一步对胃上皮细胞的MHC-I和MHC-II分析，见BALB/c的MHC-I呈弱表达，而MHC-II近乎缺如（1.66％），在TxA23自身免疫性慢性萎缩性胃炎模型小鼠的胃上皮细胞中，MHC-I和MHC-II均呈非常高的表达，因此会更容易导致免疫细胞对其破坏。



思考
这是流式在小鼠胃上皮细胞中的应用，是否在人的胃上皮细胞中也可以应用呢？消化科的朋友们可以考虑做做看，胃上皮细胞及其浸润免疫细胞进行细致的分析，可能能出来更多有意思的数据。


参考文献：
Bockerstett KA, Wong CF, Koehm S, Ford EL, DiPaolo RJ. Molecular Characterization of Gastric Epithelial Cells Using Flow Cytometry. Int J Mol Sci. 2018 Apr 6;19(4). pii: E1096. doi: 10.3390/ijms19041096.