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[流式相关软件] 人外周血Treg

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发表于 2018-5-12 10:07:19 | 显示全部楼层 |阅读模式
10流星
取外周抗凝血100ul,加入20ulCD45,CD4抗体,避光室温抚育15分钟,2mi溶血素裂红,裂解10分钟,500g离心,倒上清。加入1mi流失缓冲液,离心,弃上清。加入1mi1*FIX/Perm 4度避光45分钟,之后步骤按BD专用破膜说明书进行。上机结果如图,专业老师说FOXP3有问题或没标上,不知原因,请老师帮忙分析下。

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发表于 2018-5-12 16:09:13 | 显示全部楼层
十字门往下移,有阳性群的,只不过分的不是很开。不是抗体问题就是破膜效率问题。
如果有需要,我们的MemMagician破膜剂可以破核膜,可以试用看看,联系我们团队的汪庆东 wangqingdong@flowcyto.cn(微信号 13063870393)即可
 楼主| 发表于 2018-5-12 16:55:00 | 显示全部楼层
倪老师,我这样做标记可以吗?是标CD45CD4FOXP3还是CD4CD25FOXP3更好呢?
发表于 2018-5-13 11:35:38 | 显示全部楼层
刘qhd 发表于 2018-5-12 16:55
倪老师,我这样做标记可以吗?是标CD45CD4FOXP3还是CD4CD25FOXP3更好呢?

有foxP3的话,两者问题都不太大。
 楼主| 发表于 2018-5-14 14:44:55 | 显示全部楼层
老师,你在帮忙看一下。CD45Percp,CD4 FITC,FOXP3APC,结果怎么又是这样啊
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发表于 2018-5-14 22:18:48 | 显示全部楼层
刘qhd 发表于 2018-5-14 14:44
老师,你在帮忙看一下。CD45Percp,CD4 FITC,FOXP3APC,结果怎么又是这样啊

只圈淋巴细胞门,然后显示CD4和foxP3看看。
 楼主| 发表于 2018-5-18 20:50:31 | 显示全部楼层
又做了一次,标记CD4FITC,CD25PE,FOXP3APC,由于电脑太老了,导不出原始数据,请老师帮忙看下,FOXP3一点都没有,一共做了4管,CD4CD25都能标上,FOXP3都没有
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 楼主| 发表于 2018-5-18 20:56:17 | 显示全部楼层
还是因为我设门有问题呢?
发表于 2018-5-21 09:21:57 | 显示全部楼层
刘qhd 发表于 2018-5-18 20:56
还是因为我设门有问题呢?

另一个帖中已回答。另外,从上面这个图中看出,你目前的红细胞裂解效果不好,到时候MemMagician测试好之后,将FCS文件发给我们汪老师即可。
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