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[标本处理] 有谁做过单核/巨噬细胞的吞噬实验的

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发表于 2018-5-21 12:21:13 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
最近在做这个实验,一直没有什么区别。我是这么做的:PBMC用x-vivo培养基(无血清)贴壁两个小时,去掉悬浮细胞,加药加肿瘤细胞(带GFP),共培养2个小时,收集细胞悬液(不消化),然后流式检测CD14和GFP双阳性的部分即为吞噬肿瘤细胞的单核/巨噬细胞。这样流程有问题吗?因为药的确是结合在肿瘤细胞上了的,所以一直搞不懂为什么会没有效果。

发表于 2018-5-21 12:56:13 | 显示全部楼层
要分析的是巨噬细胞,都贴壁了为什么不消化呢?肿瘤细胞2个小时也会大量贴壁,你现在这样做应该没有什么细胞吧?
并且cd14应该很少。
 楼主| 发表于 2018-5-21 16:28:02 | 显示全部楼层
otoizz 发表于 2018-5-21 12:56
要分析的是巨噬细胞,都贴壁了为什么不消化呢?肿瘤细胞2个小时也会大量贴壁,你现在这样做应该没有什么细 ...

细胞不会太少,CD14阳性部分也还可以,一般在10%左右,就是每组没有区别,我尝试过用贴壁+GM-CSF培养7d,结果CD14阳性的细胞一点都没了。(多数文章的确都是拿M-CSF做的,因为GM-CSF是现成的,然后也有人这么干的,所以才试一试,结果连CD14+的细胞都没了)
发表于 2018-5-21 18:55:41 | 显示全部楼层
ghqiu09 发表于 2018-5-21 16:28
细胞不会太少,CD14阳性部分也还可以,一般在10%左右,就是每组没有区别,我尝试过用贴壁+GM-CSF培养7d, ...

加了GM-CSF之后,粒系分化如何?如果粒细胞也多,说明可能都被诱导往粒系分化了。否则,就可能诱导无效。
发表于 2018-5-23 16:13:59 | 显示全部楼层
吞噬通常检测小颗粒,细菌等。肿瘤细胞做杀伤比较好,一个巨噬细胞吞不下一个肿瘤细胞。而且GFP蛋白连同肿瘤细胞被巨噬细胞吞入后被溶酶体水解荧光会猝灭掉。
 楼主| 发表于 2018-5-24 09:09:47 | 显示全部楼层
a86856635 发表于 2018-5-23 16:13
吞噬通常检测小颗粒,细菌等。肿瘤细胞做杀伤比较好,一个巨噬细胞吞不下一个肿瘤细胞。而且GFP蛋白连同肿 ...

我想如果是吞噬作用的话,杀伤能测得出来吗?杀伤的原理不是测胞内释放的某些酶吗?吞噬应该不能释放吧?现在大多数文章做巨噬细胞吞噬作用基本都是用这种方法做的或者标记CFSE
发表于 2018-5-24 19:33:37 | 显示全部楼层
曹雪涛的《免疫学技术及其应用》有详细巨噬细胞抗肿瘤的protocol
发表于 2019-1-30 04:28:22 | 显示全部楼层
楼上有这个protocol的照片吗?
跪求~~~
发表于 2019-1-30 23:02:10 | 显示全部楼层
zhao271404 发表于 2019-1-30 04:28
楼上有这个protocol的照片吗?
跪求~~~

2019-01-30_230140.gif
发表于 2019-1-31 08:29:01 | 显示全部楼层
ghqiu09 发表于 2018-5-21 16:28
细胞不会太少,CD14阳性部分也还可以,一般在10%左右,就是每组没有区别,我尝试过用贴壁+GM-CSF培养7d, ...

加了gm-csf,单核可以被诱导成dc,你测一下CD11c看看
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