关于CFSE染色的问题

lypzy1221

倪老师好，我想请教一下有关CFSE染色的问题。
我有一个实验，想要知道CD4和CD8细胞的增殖情况，对人外周血单个核细胞CFSE染色，刺激培养后的d4/d6/d8取样进行流式检测，检测内容为PE-CD3+APC-CD8+CFSE、PE-CD4+CFSE。（检测机器：BD C6）
CD8细胞的增殖情况可以理解。CD4细胞的CFSE在d6和d8时基本相同，但是比d4的时候还右移了，请问您知道这是什么原因吗？
如图：红色是d4天检测的；蓝色是d6天检测的；绿色是d8天检测的结果。

CFSE结果

lypzy1221

哦？没有人来回答了。。。

niwanmao

奇怪，都没注意到这个问题。
CD4细胞出现的问题，是否可能是附近的通道荧光渗漏引起？而且，不同次检测的时候，可能会存在一定的偏差

南瓜妹妹

niwanmao 发表于 2018-6-21 10:22
奇怪，都没注意到这个问题。
CD4细胞出现的问题，是否可能是附近的通道荧光渗漏引起？而且，不同次检测的时 ...

倪老师，是不是死活染料和CD4的荧光都要避开与FITC荧光交叉，我的死活染料是BV510，CD4施PE荧光的，CFSE的电压太低，导致补偿无法调节

niwanmao

南瓜妹妹 发表于 2020-1-6 22:41
倪老师，是不是死活染料和CD4的荧光都要避开与FITC荧光交叉，我的死活染料是BV510，CD4施PE荧光的，CFSE ...

最好是避免。
CFSE是染色浓度太低还是电压低？

南瓜妹妹

niwanmao 发表于 2020-1-7 19:45
最好是避免。
CFSE是染色浓度太低还是电压低？

是电压，CSFE浓度是5uM的，电压230，电压低了和其他荧光的补偿很难调，尤其是PE

niwanmao

南瓜妹妹 发表于 2020-1-8 11:07
是电压，CSFE浓度是5uM的，电压230，电压低了和其他荧光的补偿很难调，尤其是PE ...

调高电压试试。

南瓜妹妹

niwanmao 发表于 2020-1-8 14:05
调高电压试试。

在染了CFSE之后上机，圈的是淋巴细胞群，如果把电压调高CFSE右侧的阳性峰就会超出10^5，我尝试过，调高电压到400时补偿很好调，但是阳性峰就跑出去了；今天又重新做了一下，发现用浓度0.5um的CSFE时，其电压为280，与PE之间的补偿在165，与BV510（死活染料）之间的补偿在110，是不是有点太高了？补偿可以调出来，就是太大了，这样的补偿可以用吗？

niwanmao

南瓜妹妹 发表于 2020-1-9 23:11
在染了CFSE之后上机，圈的是淋巴细胞群，如果把电压调高CFSE右侧的阳性峰就会超出10^5，我尝试过，调高电 ...

最好有图传上来看看，如果实在不行，可用斜向十字门。

南瓜妹妹

niwanmao 发表于 2020-1-9 23:44
最好有图传上来看看，如果实在不行，可用斜向十字门。

好的，今天没有把图拷下来，明天上图