有关小鼠主动脉组织巨噬细胞分型的一些问题

ucbio

不知道有没有老师做过小鼠主动脉组织的巨噬细胞分型，我在湘雅医学院一位老师（老师的动物模型是主动脉瘤）的强烈要求下做了一点尝试，但发现有以下问题：
1、主动脉组织消化下来的细胞量真的不多；好几次都只有几万个，方法用的倪老师13年发布的帖子http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2500-1-1.html
2、因为细胞量的问题，导致最后CD45（老师用的CD45，一般建议是用CD11b）+F4/80双阳性的比例不多，而且是模型组，对照组更惨。
3、我做实验用的panel如下：blank、iso、CD45、CD45+F4/80、CD45+F4/80+CD16/32+CD206（一般情况下，我们建议巨噬细胞做Fc端封闭，M1用CD80/CD86，M2用CD163/CD206。老师提供的抗体是这样，我只能硬着头皮做，后续已经建议老师做Fc端封闭，并且CD45换成CD11b，M1型和M2型的指标均已更换）。最后破膜后加CD206，300ul buffer上机。
结果如下，我是不是很满意结果。

主动脉

主动脉

目前我比较纠结的一个问题是：
1、巨噬细胞一般用骨髓和腹水做的比较多，用主动脉做的老师确实是头一回，不知这个有没有意义，客户的动物模型是主动脉瘤，如果主动脉组织没有意义或者实在尝试不出的话是否可以用别的组织？
2、对于主动脉组织来说，消化整个组织有时候细胞总数不到50000个，这样做起来其实很头疼，数量太少了，能不能用多只小鼠的主动脉组织进行。

niwanmao

1、用主动脉做应该是有意义的，因为组织内的免疫细胞功能更直接。这个设门我认为应该通过散点图，而不是用直方图比较。
2、50000个细胞已经算不错了。

ucbio

niwanmao 发表于 2018-7-11 16:23
1、用主动脉做应该是有意义的，因为组织内的免疫细胞功能更直接。这个设门我认为应该通过散点图，而不是用 ...

谢谢倪老师。
补问一个巨噬细胞的问题，小鼠肝脏kupffer细胞制备一般是原位灌洗和原位胶原酶消化。但我需要同时做巨噬细胞分型、T淋巴细胞和Treg，我是直接用原位灌洗+原位胶原酶消化的方式还是说可以用先用手术剪剪碎肝脏再进行胶原酶消化的方式。

niwanmao

ucbio 发表于 2018-7-16 11:21
谢谢倪老师。
补问一个巨噬细胞的问题，小鼠肝脏kupffer细胞制备一般是原位灌洗和原位胶原酶消化。但我需 ...

肝脏性质很脆，轻轻一磨就能磨成单细胞，但是得到的活性会比较差。所以用剪碎可能会影响，不过可以少剪几块再消化可能会比较好一点吧。