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[细胞增殖] CFSE法测细胞增殖

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发表于 2018-8-21 12:40:49 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
最近在做CFSE检测CD3 T细胞增殖情况,实验结果不确定如何圈门分析,向各位老师请教一下,非常感谢!
一、实验步骤
1. 复苏CD3T细胞,直接第三天后上机检测亚群。结果如图1.
2. 使用CFSE,每10^6细胞,加入1 mLCFSE稀释液分别选择浓度为2.5uM,5uM,10uM。37℃20分钟后,用预冷的10%FBS 1640培养基终止,离心去上清,用培养基洗2次后,再加入新鲜培养基,接种细胞到6孔板中培养,每孔3ml培养基,2X10^6细胞。六孔板用Anti-CD3预包被,37℃包被2h。
3. 培养2天后,发现培养基变黄,换液一次。
4. 继续培养2天,取细胞,BD Callibur检测,每样本收1万细胞。结果如图2  全部都没有增殖,是我的条件哪里不对吗还是什么原因,希望大家指教一下谢谢。

20180821-布局页.png
20180816-单独亚群CD3 CD4 CD25 CD8.png
 楼主| 发表于 2018-8-21 12:41:59 | 显示全部楼层
0816是细胞亚群分析,0821是CD3刺激4天后的增殖结果图。
发表于 2018-8-24 13:31:52 | 显示全部楼层
同问,之前我检测CD4+T cell的增殖也基本没有变化~
发表于 2018-8-28 10:32:58 | 显示全部楼层
是不是要加点细胞因子,比如IL-2?不然细胞会死掉的吧。
发表于 2018-8-28 10:47:41 | 显示全部楼层
两个问题,第一OKT3包被的浓度是多少?会不会少了?第二个问题,是否要加anti-CD28?
发表于 2018-9-5 22:34:22 | 显示全部楼层
1.可能染色时间过长,导致细胞中毒
2.建议加上死细胞排除染料染色可以参考附件

Monitoring lymphocyte proliferation in vitro.pdf

484.76 KB, 下载次数: 54

发表于 2019-4-15 20:54:00 | 显示全部楼层
我在做实验的时候试验过浓度 2.5uM的CFSE浓度太高了,0.5uM就可以有很高的荧光强度,并且不影响细胞受刺激后的增值。

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