小鼠PBMC流式检测后散射图显示的都是碎片吗？

我是二十

mybiosciences 发表于 2018-9-8 22:54
是提取的小鼠外周血pbmc吗？
直接染色溶血或者溶血染色就可以啊，干嘛要提取，丢失太严重了。
细胞丢失一般 ...

是啊，离心丢失细胞太多，并且红细胞裂解液的效果不是很好，反复裂解，所以我想这个可能也是一个原因。但是之前人的PBMC做出来效果就还可以。

我是二十

mybiosciences 发表于 2018-9-8 22:54
是提取的小鼠外周血pbmc吗？
直接染色溶血或者溶血染色就可以啊，干嘛要提取，丢失太严重了。
细胞丢失一般 ...

是啊，离心细胞丢失太多了。因为之前用的红细胞裂解液效果不好，反复裂解，导致最后没有洗白白，所以就用淋巴细胞分离液了。

niwanmao

我是二十 发表于 2018-9-11 11:14
谢谢啦！这个机器是uava的，后来联系工程师说这个坐标改不了，就把lin改成了log ...

建议换台机器试试。有时候未必就是样本问题，而可能是机器问题。

mybiosciences

我是二十 发表于 2018-9-11 11:25
是啊，离心丢失细胞太多，并且红细胞裂解液的效果不是很好，反复裂解，所以我想这个可能也是一个原因。但 ...

估计你用的是氯化铵配方的ACK溶血素，可以试试含多聚甲醛的溶血素，不过是先染后溶的

mybiosciences

我是二十 发表于 2018-9-11 11:23
谢谢老师，那要是样本的问题的话就是说这个都是死细胞或细胞碎片吗？我后来用胸腺做的散射图是这样的，调 ...

对这款仪器不熟，可以试试小鼠脾脏细胞（研磨后过300目筛网然后溶红）或者溶红后的外周血（溶不好也没关系）试试，细胞群还是出不来可能就是仪器的问题了

我是二十

niwanmao 发表于 2018-9-11 17:40
建议换台机器试试。有时候未必就是样本问题，而可能是机器问题。

谢谢老师，我们因为条件的原因暂时还不能用别的机器试，这个是人PBMC，通过这个图老师能给指出什么问题吗？我框出的这群是淋巴细胞吗？

人PBMC

我是二十

mybiosciences 发表于 2018-9-13 00:51
对这款仪器不熟，可以试试小鼠脾脏细胞（研磨后过300目筛网然后溶红）或者溶红后的外周血（溶不好也没关 ...

SP

这个是小鼠脾脏裂红以后的散射图，还是没有没有明显分群，我以后要检测淋巴细胞，就这样直接圈所以的细胞分析合适吗？

mybiosciences

FSC/SSC用log模式是没没法看到明显的细胞分群的，如果还是感觉圈门有问题，可以试试用marker反向圈门找到你想要的细胞群。

我是二十

mybiosciences 发表于 2018-9-16 10:44
FSC/SSC用log模式是没没法看到明显的细胞分群的，如果还是感觉圈门有问题，可以试试用marker反向圈门找到你 ...

嗯，好的，谢谢您的建议