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[标本处理] 小鼠脾脏淋巴细胞亚型

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发表于 2018-9-21 14:51:50 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
请问小鼠脾脏碾碎后,收集悬液使用红细胞裂解液进行裂红时,裂红的时间和红细胞裂解液的用量怎么判断,谢谢。

发表于 2018-9-21 15:19:48 | 显示全部楼层
氯化铵裂解液一般用10倍以上体积,裂10~15分钟。
 楼主| 发表于 2018-9-21 15:36:10 | 显示全部楼层
我用的产品主要成分也是氯化铵,但说明书介绍3倍体积,5分钟就可以了,但这样做效果不好,是不是应该换试剂?说明书:在血液样品中加入3倍体积红细胞裂解液 (例如,300 μl血液加入900 μl红细胞裂解液),颠倒混匀,室温放置5分钟,期间再颠倒混匀几次 ,  10000rpm离心1分钟(若是离心机最高转速不允许,可以3000rpm离心5分钟),吸去上清,留下白细胞沉淀进行后续操作。
发表于 2018-9-21 15:39:11 | 显示全部楼层
xinxinquanquan 发表于 2018-9-21 15:36
我用的产品主要成分也是氯化铵,但说明书介绍3倍体积,5分钟就可以了,但这样做效果不好,是不是应该换试剂 ...

3倍裂不好 的。离心速度太高了,2000~3000差不多了。
发表于 2018-9-21 16:47:58 | 显示全部楼层
我之前一般都是用红细胞裂解液直接重悬,然后室温放三五分钟就够了,裂完全了离心之后沉淀就是白色的,会有一点红细胞在最上层
发表于 2018-9-25 08:07:43 | 显示全部楼层
我用的是BD的红细胞裂解液,稀释成1倍的,然后加2ml裂解8-10min就行了
发表于 2018-9-25 09:45:19 | 显示全部楼层
xinxinquanquan 发表于 2018-9-21 15:36
我用的产品主要成分也是氯化铵,但说明书介绍3倍体积,5分钟就可以了,但这样做效果不好,是不是应该换试剂 ...

从你说的晴况来看,问题出来离心上。离心力太大了,细胞可能碎了,240G,别超过300G效果比较好。你可以裂解后不离心,直接上机看看细胞的形态,就知道是什么问题了。
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