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[结构和原理] 关于散点图形态

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发表于 2018-10-6 09:29:07 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
请问大家为什么有的流式图能做出图1那种很好看的圆形抱团 ,有的就是图2那种梭形的呢?尝试过调整电压等,发现还是没啥用呀。。。请高人指点谢谢了!

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发表于 2018-10-6 11:10:16 | 显示全部楼层
1、跟抗原本身的表达模式有关。
2、跟非特异性结合的程度有关。
3、你这里对比的是阳性群和阴性群,没有可比性。
发表于 2018-10-8 09:55:04 | 显示全部楼层
图2的丝状的是因为坐标轴引起的,10的0次方到10的1次方,同样的距离,数值(1,2,3.。。)少很多,所以会这样。解决的办法就是加入双对数坐标轴
 楼主| 发表于 2018-10-8 19:50:09 | 显示全部楼层
ghqiu09 发表于 2018-10-8 09:55
图2的丝状的是因为坐标轴引起的,10的0次方到10的1次方,同样的距离,数值(1,2,3.。。)少很多,所以会 ...

谢谢解答 但是坐标更改试过了  没有啥效果。。。
 楼主| 发表于 2018-10-8 19:56:11 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2018-10-6 11:10
1、跟抗原本身的表达模式有关。
2、跟非特异性结合的程度有关。
3、你这里对比的是阳性群和阴性群,没有可 ...

谢谢大佬!!其实我这是随便选的两张结果图,不是一个实验的,也没有比较的意思吧。有的时候空白管都有这样的情况,有的空白管就是很好看的圆球,有的就是这种自左下向右上的瓜子形状,反而是更换纵坐标荧光选项,葵花籽还能变成西瓜子也不想影响实验吧  就是单纯好奇,请问大佬的流式图是不是一般都做得形状很圆呀  像我们这种是不是电压调的不好?
 楼主| 发表于 2018-10-8 20:08:35 | 显示全部楼层
ghqiu09 发表于 2018-10-8 09:55
图2的丝状的是因为坐标轴引起的,10的0次方到10的1次方,同样的距离,数值(1,2,3.。。)少很多,所以会 ...

不是说丝状呀  丝状是可以换坐标改变的 是指整个细胞团的形状
 楼主| 发表于 2018-10-8 20:15:06 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2018-10-6 11:10
1、跟抗原本身的表达模式有关。
2、跟非特异性结合的程度有关。
3、你这里对比的是阳性群和阴性群,没有可 ...

谢谢大佬!!我这是随便选了两次实验的结果图,也没有比较的意思吧。有的时候连Blank管都有这种情况出现,有的就是好看的一个原团,有的就是自左下向右上的瓜子型。更换纵坐标的荧光,倒是会有些变化  譬如从葵瓜子变成西瓜子状。所以不知道是不是因为电压调的不对导致的?大佬平时的流式图一般都是好看的原团形吗?另外就是想请问大佬,像下图这种情况是怎么回事呢?都是balnk细胞,图一是单纯的Blank,图二是加了APC二抗对照组,图三是加了APC标记的一个指标抗体,按道理都是阴性结果,为什么位置会差的这么大呢??是因为抗体没洗干净,还在buffer里面吗??
图片1.png
发表于 2018-10-9 08:14:21 | 显示全部楼层
王风 发表于 2018-10-8 19:56
谢谢大佬!!其实我这是随便选的两张结果图,不是一个实验的,也没有比较的意思吧。有的时候空白管都有这 ...

对于荧光组合的散点图,与细胞自发荧光有关,例如淋巴细胞自发荧光弱,所以其阴性细胞群大多可以呈偏圆的分布,而粒细胞等自发荧光偏强的,往往会呈斜向分布。但是你上面这几张图,本身选的坐标就不对,横坐标选择FSC,这样的坐标组合,更加不能用什么形状来衡量好坏了,因为FSC反映的是细胞大小,细胞大小不同,你最后拿到的图形当然也不同。

点评

非常感谢,这些资料对我很有帮助: 4.0
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  发表于 2018-10-9 08:30

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王风 + 1 辛苦了

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 楼主| 发表于 2018-10-9 14:54:24 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2018-10-9 08:14
对于荧光组合的散点图,与细胞自发荧光有关,例如淋巴细胞自发荧光弱,所以其阴性细胞群大多可以呈偏圆的 ...

谢谢!第一个问题,我明白您的意思了,就是形状还是自发荧光有关吧!但后面贴的三张图是想请教您另一个问题,就是这三张都是blank,按理说都应该是阴性结果,第一张是纯blank,第二张是blank+APC标记的羊抗人Fc二抗对照(实际是647,用的是APC通道),第三张balnk+APC标记的一个直标抗体(balnk不表达此抗体针对的靶标),为啥细胞群位置会相差这么大呢?我自己想是否是因为抗体没有洗干净还在buffer里面还是因为有非特异性结合呢,我的细胞是T细胞按理说也没有啥Fc受体呀。也有人说是647这个荧光不行,它的非特就是药品厉害些,想请教下您怎么认为,谢谢赐教!
发表于 2018-10-9 18:56:34 | 显示全部楼层
王风 发表于 2018-10-9 14:54
谢谢!第一个问题,我明白您的意思了,就是形状还是自发荧光有关吧!但后面贴的三张图是想请教您另一个问 ...

当然不一样,用的东西不一样,结果当然也不同。
所有东西都不加的样本,只适合调节初步的电压,不能用于分析设门。
至于后面两个图,因为你用的二抗不同,结果当然不同,需要你根据实验需要,选择正确的二抗。

至于淋巴细胞没有Fc受体,倒也不是那么绝对:http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-6255-1-1.html
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