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[功能检测] 全血血小板流式分析

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发表于 2018-10-14 16:09:26 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
请问各位老师
实验室小白目前在做人血小板活化功能
看了许多文献都是全血分析血小板
文献给出的图片如下图

原始文献中流式

原始文献中流式

可以看出血小板的分布
而我的为

我试验显示的流式

我试验显示的流式

整个都黏附在一起的

用的我自己的血做的
采用的3.2%柠檬酸钠管,
5ul全血+5ul CD41+35ulpbs
另外用稀释血做过,40ul全血+800ulPBS
取20ul稀释血+5ulCD41 15分钟温育
加2mlPBS上机
不知道哪里出了问题

发表于 2018-10-15 08:59:03 | 显示全部楼层
看软件界面,感觉是某台机器,不作评论。

你可以换台其它品牌的机器试试看。
 楼主| 发表于 2018-10-30 00:03:04 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2018-10-15 08:59
看软件界面,感觉是某台机器,不作评论。

你可以换台其它品牌的机器试试看。 ...

谢谢倪老师,后来实验室有师姐帮我调整以后可以出现分群的图像了
倪老师我想请教
①抗体饱和这个问题,说明书上的原话是“One test corresponds to labeling of up to 10^6 cells in a total volume of 100 µL
因为血小板很娇气,特别容易就活化了,为了避免振荡,之前我的参考文献都没有洗标本,故我也没有洗,不存在把多余抗体洗掉,之前的文献也是说把抗体滴定到饱和,这个问题像请教老师,我该怎么处理
②基本我每次收20万个颗粒,病人情况差一些的话,20万个颗粒里面只有1000个血小板,是不是1000个细胞测MFI不太准确?有时候直方图是很低很散的,我该怎么办呢?

全血血小板分析

全血血小板分析
发表于 2018-10-30 07:48:27 | 显示全部楼层
W3YC 发表于 2018-10-30 00:03
谢谢倪老师,后来实验室有师姐帮我调整以后可以出现分群的图像了
倪老师我想请教
①抗体饱和这个问题,说 ...

1、血小板容易活化,其实之前抽血就存在这个概率,染色之后再洗涤,不会使血小板活化而结合抗体的,因为抗体已经被洗掉了。
抗体滴定,是为了寻找最佳用量,即在那个用量时,阳性群和阴性群隔的最开。
2、对于单群的,1000个也勉强够。如果想取得多,可以选择只保存P4门内的细胞,使其获取到20万,对于血小板获取到20万没有任何问题
 楼主| 发表于 2018-10-30 17:46:32 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2018-10-30 07:48
1、血小板容易活化,其实之前抽血就存在这个概率,染色之后再洗涤,不会使血小板活化而结合抗体的,因为 ...

倪老师感谢您的耐心恢复
我打算尽快完成抗体滴定
但是目前有一个问题,血小板不像白细胞或者红细胞,它变数很大,我们科室患者血小板10-200多不等,滴定抗体前需要固定所测细胞数。但是每个血样的血小板计数就是不一样的,我是不是有关按不同的细胞数滴定抗体,每次实验前先明确这个血样里大致的血小板数量,然后再给不同的抗体量
只是这样实施起来太麻烦

发表于 2018-10-30 21:01:17 | 显示全部楼层
W3YC 发表于 2018-10-30 17:46
倪老师感谢您的耐心恢复
我打算尽快完成抗体滴定
但是目前有一个问题,血小板不像白细胞或者红细胞,它变 ...

滴定,主要是根据总体积,细胞数量相差10倍以内对滴定结果无太大影响。
 楼主| 发表于 2018-10-31 00:23:09 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2018-10-30 21:01
滴定,主要是根据总体积,细胞数量相差10倍以内对滴定结果无太大影响。

非常感谢倪老师
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