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[淋巴细胞相关] THP-1诱导的M2巨噬细胞分型

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发表于 2018-11-1 10:51:03 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
本帖最后由 旅行到边际 于 2018-11-1 10:51 编辑

大家好!我最近在做THP-1细胞经100ng/ml PMA和20ng/ml IL4/13诱导成M2巨噬细胞的实验,出现了很多问题,想请教一下!!!                                 大致的流式思路是:1. 先用7-AAD或者FVD450分析死活细胞 2.活细胞中分析CD11B/CD163/CD206的表达情况
请教一下:A. 1图中blank(M0和M2的混合细胞)为啥跑出来7-AAD是这幅模样?左下角那一小群细胞是什么?  B. 1图中M0和M2的7-AAD图为啥会出现右边两个小群细胞?活细胞怎么那么少?
C. 2图中用FVD450进行染色,阴性细胞群的位置为什么是在FSC/SSC的最左下角那一群?难道或者的细胞都是比较小,比较简单的细胞?
D. 3图中不考虑死活细胞情况下,没有粘连细胞,这样分析对不对?为啥主群细胞附近还有一小群细胞?
E. 4图中用细胞百分比及平均荧光强度分析,这样的结果可以么?感觉跟问下差异很大。
F. 这类实验具体的一个结果分析是怎么样的?要如何去分析结果?或者有什么其他好的建议?



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 楼主| 发表于 2018-11-1 10:54:36 | 显示全部楼层
各位大神,帮忙分析分析,谢谢
发表于 2018-11-1 16:34:21 | 显示全部楼层
图形成这样,应该与机器有关。可以先跑一下微球质控看看,如果没问题,说明机器本身显示就这样。左下角那群是指没在门内的那些?一般可认为是碎片,但建议加上CD45会更好确定性质。
我的建议你现在先用FVD和7-AAD阴性细胞分析
 楼主| 发表于 2018-11-2 10:42:26 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2018-11-1 16:34
图形成这样,应该与机器有关。可以先跑一下微球质控看看,如果没问题,说明机器本身显示就这样。左下角那群 ...

倪老师,您好!谢谢您的回复!最近质控微球用完了,还没到货,所以这次实验是没有质控的,但是其他人也都用这机子跑,跑出来没有啥问题的,之前每次做试验前都有质控,也都是过关的。
左下角那一群细胞,就是没在圈门的细胞,我想问下,碎片不是直接用FSC/SSC就可以区分出来的么?我也有先用了FVD阴性的细胞进行分析了,结果跟这个差不多,CD206一直没有跑出来差异,也不知道是为什么?
另外,我圈住了1图中所谓的碎片,发现它的位置是在FSC/SSC图的最左下角那一群细胞,与FVD阴性群的细胞位置是一致的,这一点特别奇怪。
最后我还想问一下您,我这个分析思路是不是正确的?谢谢您了,做了好几次实验都出不来~
 楼主| 发表于 2018-11-2 10:54:36 | 显示全部楼层
这是图片
IMG_7703.JPG
发表于 2018-11-5 08:12:38 | 显示全部楼层
旅行到边际 发表于 2018-11-2 10:42
倪老师,您好!谢谢您的回复!最近质控微球用完了,还没到货,所以这次实验是没有质控的,但是其他人也都 ...

碎片染不上死活染料是对的。
 楼主| 发表于 2018-11-5 08:29:38 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2018-11-5 08:12
碎片染不上死活染料是对的。

倪老师,那这次实验的死活细胞得如何分析?FVD450阴性是碎片么?那不是没有活细胞了?
发表于 2018-11-5 15:05:15 | 显示全部楼层
旅行到边际 发表于 2018-11-5 08:29
倪老师,那这次实验的死活细胞得如何分析?FVD450阴性是碎片么?那不是没有活细胞了? ...

FVD450和7-AAD阴性部分,再通过FSC/SSC排除碎片即可。
 楼主| 发表于 2018-11-5 16:54:53 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2018-11-5 15:05
FVD450和7-AAD阴性部分,再通过FSC/SSC排除碎片即可。

那阴性细胞为啥感觉像碎片一样,结构很简单的。。。倪老师,我这实验思路有没有问题呢?后续如果要重新进行实验,下一步您有什么好的建议?
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