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[其它] 多克隆抗体 抗人纤维蛋白原

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发表于 2018-11-3 01:15:29 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
我目前在做血小板表面抗体的分析,参考的原始文献里曾用一种多克隆抗体:抗人纤维蛋白原,对血小板进行了染色,但是文献里并未提及多克隆抗体如何设门,想请教倪老师和其他广大Flowers,谢谢!

微信图片_20181103011203.jpg
发表于 2018-11-3 09:32:03 | 显示全部楼层
你是准备分析血小板表面的纤维蛋白原结合量吧?那么就用FSC-LOG/SSC-log设门,圈中血小板区域,如果希望更准确,可再加上CD61设门。
 楼主| 发表于 2018-11-3 10:11:23 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2018-11-3 09:32
你是准备分析血小板表面的纤维蛋白原结合量吧?那么就用FSC-LOG/SSC-log设门,圈中血小板区域,如果希望更 ...

倪老师,我是打算用这个抗体看血小板的激活情况,我试验之前空白对照的话,确实激活的血小板比未激活的血小板更高的表达 Anti-Fibrinogen,但是我们实验室之前也没有人用过多克隆的抗体,您知道多克隆抗体如何设门吗?我用的CD41a标记血小板
 楼主| 发表于 2018-11-3 10:19:53 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2018-11-3 09:32
你是准备分析血小板表面的纤维蛋白原结合量吧?那么就用FSC-LOG/SSC-log设门,圈中血小板区域,如果希望更 ...

倪老师您看,图4是我画的血小板门,用CD41a和SSC,圈出了血小板
然后在标记FBG,就是抗纤维蛋白原,之前是空白标记,后面在十字门以上的就是激活和未加激活剂的血小板

CD41a/SSC

CD41a/SSC

ADP激活后

ADP激活后

未激活

未激活

空白

空白
发表于 2018-11-3 11:14:13 | 显示全部楼层
W3YC 发表于 2018-11-3 10:19
倪老师您看,图4是我画的血小板门,用CD41a和SSC,圈出了血小板
然后在标记FBG,就是抗纤维蛋白原,之前 ...

多抗和单抗的设门原则是一样的,只是因为它结合的靶点多而已。
你这样的设置是合理的。如果在用EDTA抑制一下,就更能证实这个结合的特异性了,参考2006年的一篇文章:http://www.jbc.org/content/early ... M605877200.full.pdf
 楼主| 发表于 2018-11-3 15:41:34 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2018-11-3 11:14
多抗和单抗的设门原则是一样的,只是因为它结合的靶点多而已。
你这样的设置是合理的。如果在用EDTA抑制 ...

倪老师,你是指用EDTA抑制空白管吗?
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