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[标本处理] 红细胞染色protocol

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发表于 2018-11-8 10:11:02 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
hi
各位老师,有没有做红细胞染色的方案啊,我在论坛里看了如何获取红细胞,但是我实验部分比较模糊,用抗体染色的时候还会出现细胞凝集成快,染色效果很差,怎么解决呢?

发表于 2018-11-9 07:43:41 | 显示全部楼层
染色时为什么会细胞凝集?没加抗凝剂?
 楼主| 发表于 4 天前 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2018-11-9 07:43
染色时为什么会细胞凝集?没加抗凝剂?

有抗凝剂,我取了5ul全血染色红细胞,但染完一抗后红细胞都聚集成小团快了。
发表于 4 天前 | 显示全部楼层
我想成大牛 发表于 2018-11-13 13:06
有抗凝剂,我取了5ul全血染色红细胞,但染完一抗后红细胞都聚集成小团快了。 ...

我平时也做PNH的红细胞染色,是将10ul抗凝全血加入到1mlPBS中,然后再取100ul。
 楼主| 发表于 前天 09:26 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2018-11-13 21:24
我平时也做PNH的红细胞染色,是将10ul抗凝全血加入到1mlPBS中,然后再取100ul。 ...

我做的是CD235a,昨天看了一些文献,他们是0.5ul血加入到50ul PBS里面,1500rpm 5min这样的洗涤条件。我试了一下,先按照条件将0.5ul的血分别加入到50ul的PBS和MACS里面,然后将0.5ug的间标抗体分别加进去,混匀后静置。结果15min后还是会出现聚集,移液器吹打都散不开,PBS和MACS没有明显的区别。
发表于 昨天 08:23 | 显示全部楼层
我想成大牛 发表于 2018-11-15 09:26
我做的是CD235a,昨天看了一些文献,他们是0.5ul血加入到50ul PBS里面,1500rpm 5min这样的洗涤条件。我 ...

MACS不是磁珠分选吗?
有没有试过我前面说的方法,我们做PNH也是用CD235a标记红细胞的
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