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[结构和原理] 0.22μm滤膜过滤问题与流式清洗

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发表于 2018-11-21 09:52:20 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
各位老师好,最近实验室的流式细胞仪很脏,论坛的帖子都学习了一遍,但对流式的清洁效果依然不大。请各位老师给提提建议。

背景:BD FACS Canto仪器3激光十色,最近用清洗液(BD原厂FACS clean)冲洗时,上样速度选择高速(high),evt/s在120-180左右;散点图上也非常多点;FITC直方图、APC直方图、BV450直方图都有荧光强度(全部采用对数放大),分别小于10的1、10的2、10的2强度;电压与以往清洗仪器时相同,但以往散点图上非常干净。询问工程师后说,做样本时可以用水替代鞘液,然后就用0.22μm滤膜过滤后用于清洗流式。过滤水用的是真空抽滤装置。

疑惑:0.22μm过滤时,不施加压力,液体依靠自身的压强就会自己透过滤膜吗?这会不会是滤膜没放好或者是装置漏气导致的?
像我们实验室流式细胞仪的这种情况是只能选择继续清洗吗?

发表于 2018-11-21 21:28:04 | 显示全部楼层
流式脏的时候,我们会先用次氯酸进行清洗,之后再用水清洗。
发表于 2018-11-22 09:06:09 | 显示全部楼层
0.22um需要加压过滤的。

像你们说的这种情况,也不排除流动室脏,这个清洗很麻烦,需要用特殊手段冲洗,大多情况下需请工程师帮忙。
 楼主| 发表于 2018-11-22 09:54:16 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2018-11-22 09:06
0.22um需要加压过滤的。

像你们说的这种情况,也不排除流动室脏,这个清洗很麻烦,需要用特殊手段冲洗,大 ...

谢谢倪老师。您的意思可以理解成0.22μm不加压水是不会自动透过的,对吗?

我们就是不加压水会自己透过滤膜滴下去,我就觉得不对劲。
发表于 2018-11-22 10:58:47 | 显示全部楼层
1249471827a 发表于 2018-11-22 09:54
谢谢倪老师。您的意思可以理解成0.22μm不加压水是不会自动透过的,对吗?

我们就是不加压水会自己透过 ...

不知道你是怎么做的,纯水浸润滤膜后,无论滤膜孔多小,都是可以浸湿后滴下去的,除非孔径比水分子小。此外,滤膜边上的缝隙也要注意一下。
 楼主| 发表于 2018-11-23 08:27:33 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2018-11-22 10:58
不知道你是怎么做的,纯水浸润滤膜后,无论滤膜孔多小,都是可以浸湿后滴下去的,除非孔径比水分子小。此 ...

懂了,谢谢倪老师
 楼主| 发表于 2018-11-26 13:13:29 | 显示全部楼层
补个后续,没有好办法只能用笨办法了。先清洗流动室,再用clean洗5分钟,再用水洗5分钟,以这种方式连续洗了3次,有改善,清洗前CST不能通过的,现在可以通过了,就是CV比较大,考虑继续清洗。
ps:各位老师,如果你们的BD流式是没有购买每年的维修保养的话(10+万/年),从今年10月份开始工程师上门要收费啦
发表于 2018-11-26 16:43:02 | 显示全部楼层
1249471827a 发表于 2018-11-26 13:13
补个后续,没有好办法只能用笨办法了。先清洗流动室,再用clean洗5分钟,再用水洗5分钟,以这种方式连续洗 ...

工程师上门收费好几年前就开始了吧。维保是挺贵的。
 楼主| 发表于 4 天前 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2018-11-26 16:43
工程师上门收费好几年前就开始了吧。维保是挺贵的。

哦哦,可能不同地方不太一样?坐标哈尔滨,10月份工程师来了时候收费了,说我们运气不好,上个月刚说要收费
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