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[标本处理] 流式检测肿瘤组织制成的单细胞悬液里的CD4和CD8细胞比例.....

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发表于 2018-11-27 23:31:45 | 显示全部楼层 |阅读模式
5流星
获得小鼠肿瘤组织,剪子剪碎至小米粒大小,甚至还小。然后胶原酶(3mg/ml),每样3ml,37度消化15分钟后拿出来吹散,接着放10分钟。然后70um筛网过滤,取滤液,加裂解红细胞液,室温15分钟,800g,5min。然后计数,加细胞,加抗体,加细胞固定液,第二天上机。做出来的细胞比例,CD4和CD8只有0.1%,不同组别之间没有差异,不知道问题出在哪里?请大家给意见。谢谢!

 楼主| 发表于 2018-11-27 23:37:24 | 显示全部楼层
细胞固定液为4%多聚甲醛,细胞级
发表于 2018-11-28 08:38:39 | 显示全部楼层
细胞活力如何?可能细胞均死亡,导致标不上去。
发表于 2018-11-28 10:00:39 | 显示全部楼层
你这个是肿瘤组织样品,这么低很正常吧

点评

是我消化的不够充分?又怕消化过度成细胞碎片  发表于 2018-11-28 12:52
各样本之间没有差异,就很棘手。各组均在0.1%甚至还有0的情况。  发表于 2018-11-28 12:49
 楼主| 发表于 2018-11-28 12:47:56 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2018-11-28 08:38
细胞活力如何?可能细胞均死亡,导致标不上去。

细胞活力没问题。其他细胞比例很好。
发表于 2018-11-30 10:05:58 | 显示全部楼层
dchyy 发表于 2018-11-28 12:47
细胞活力没问题。其他细胞比例很好。

最好能够有图或者原始数据,这样找原因会容易一些。
发表于 2019-3-12 17:12:40 | 显示全部楼层
你好,我想请教一个问题。肿瘤组织制成的单细胞悬液里面应该大部分是肿瘤细胞,目标细胞群多吗?设门的时候是怎样排除的呢?
发表于 2019-3-13 00:10:12 | 显示全部楼层
1.不要加固定液,加上一个死细胞染料,排除死细胞
2.要加Fc受体阻断剂
3.加CD3了吗?最好再加个CD45排除一下肿瘤细胞

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