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[流式相关软件] 关于自动补偿和不同软件的补偿适配问题

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发表于 7 天前 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
各位老师好,接触了流式1年多,慢慢遇到很多问题,欢迎大家多多指教和讨论。今天问一些关于补偿的问题。

1:经过UltraComp eBead Compensation Beads (Thermo Fisher 01-2222-42)的自动补偿后,sample如果为肿瘤的话,补偿会还需要一定的再调才能合适,但是外周血或者脾脏就会比较合适或者仅需要微调。
      请教有什么方法可以让自动补偿直接就合适样本,尤其是肿瘤样本?
      另外我们已经尝试过直接用样本的细胞来当自动补偿的beads去做自动补偿,还是不太合适,况且实际情况里也不会有足够的样本细胞来做自动补偿,所以这个方法不合适。在自动补偿的方法里有什么注意点,请各位指教。


2:我们流式上机的软件是BD Diva,上机结束会直接拷出来用Flowjo调节补偿,最近我们尝试在Flowjo调节完补偿后,将补偿的数值统一到Diva里,再将文件导出,但是我们再在Flowjo里查看文件时,发现虽然补偿的数值是一样的,但是图形又不合适了,还是需要再调补偿。
     请教上述情况是为什么?
     我们是想得到Diva导出的原文件直接Flowjo打开就是合适的补偿状态,是不是还是需要在Diva中调节好补偿之后,这样导出的数据再去Flowjo打开才比较合适?


烦请赐教!非常感激!


发表于 7 天前 | 显示全部楼层
1、补偿微球设出的补偿,不适合细胞样本,因为两者的颗粒度不一样。要想让补偿能够直接适合样本,必须得样本每个标记都能做出单阳性。
2、不同软件,补偿的算法会有所不同,因此补偿矩阵不通用。
 楼主| 发表于 6 天前 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2018-12-3 15:13
1、补偿微球设出的补偿,不适合细胞样本,因为两者的颗粒度不一样。要想让补偿能够直接适合样本,必须得样 ...

1:如果需要样本每个通道都能做出单阳性的话,可不可以尝试,购买CD4的每个通道,然后用脾脏(因为细胞数目较多,可行)代替beads染panel涉及到的通道,去做自动补偿,当中电压用实际样本来确定。

2:那天是软件有些小问题,所以Diva和Flowjo数据补偿不合适。谢谢。

PS:请问老师有遇到过Diva里FSC和SSC的W、H变得很诡异,整个软件里的数据去黏粘细胞这一块的图形都变了,不知道有没有这方面的经验过,求指教!多谢。
发表于 5 天前 | 显示全部楼层
毛豆24821 发表于 2018-12-4 16:58
1:如果需要样本每个通道都能做出单阳性的话,可不可以尝试,购买CD4的每个通道,然后用脾脏(因为细胞数 ...

1、可以用CD3或CD4高表达的标记去做,串联染料会有所差异,但FITC、PE等荧光素补偿值可通用。
2、好的,合适就好:)
3、你说的FSC的H和W变的诡异,是指什么情况?
 楼主| 发表于 4 天前 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2018-12-5 15:32
1、可以用CD3或CD4高表达的标记去做,串联染料会有所差异,但FITC、PE等荧光素补偿值可通用。
2、好的, ...

推测是软件的问题,而且会所有Diva里的数据的前向测向的W和H都出问题。

FLOWJO显示

FLOWJO显示

W/H正常

W/H正常

W/H诡异

W/H诡异
发表于 4 天前 | 显示全部楼层
毛豆24821 发表于 2018-12-6 12:05
推测是软件的问题,而且会所有Diva里的数据的前向测向的W和H都出问题。

...

一般BD的机器我们用A和H
 楼主| 发表于 4 天前 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2018-12-6 13:35
一般BD的机器我们用A和H

A和H我们也用的,但是在这个诡异的软件状态中,A和H的图也不正常了,不是对角线分布的,非常的偏左上角
发表于 4 天前 | 显示全部楼层
毛豆24821 发表于 2018-12-6 13:38
A和H我们也用的,但是在这个诡异的软件状态中,A和H的图也不正常了,不是对角线分布的,非常的偏左上角 ...

如果A和H也不是线性,首先看一下Diva软件里面Area Scaling是否设置正确,如果还是纠正不了,得问一下工程师了。
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