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[标本处理] 为什么我用FITC/PI双染细胞凋亡检测,发现PI染不上?

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发表于 5 天前 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
本人用的是同仁的试剂盒
步骤,

2. 用PBS洗细胞2次,丢弃或收集清洗液保存。
3. 用胰蛋白酶消化细胞。
4. 用适量的培养基或PBS将细胞悬液转移至离心管中,
5. 1,000 rpm离心3 min,弃上清。
6. 加入PBS后1,000 rpm离心3 min,弃上清。重复本步操作一遍。
7. 加入预先配好的1×Annexin V Binding Solution,制成终浓度为1×106 cells/ml的细胞悬液。
8. 取100 ul步骤7中的细胞悬液,加入到新的tube中。
9. 向细胞悬液中加入5 ul Annexin V, FITC结合物,再加入5 ul的PI Solution。
10. 室温下避光培养15 min。
11. 加入400 ul 1×Annexin V Binding Solution,请在1 h内检测。
请流式大神帮帮忙,指点一下到底是哪里出了问题。万分感谢

 楼主| 发表于 5 天前 | 显示全部楼层

                               
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 楼主| 发表于 5 天前 | 显示全部楼层

                               
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发表于 5 天前 | 显示全部楼层

PI一般不容易失效,FSC/SSC散点图如何?
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