查看: 138|回复: 6
收起左侧

[淋巴细胞相关] 补偿过大,电压调节不合理还是其他原因?

[复制链接]
发表于 2019-1-4 00:35:33 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
老师,我最近做两套染色方案,我做第一套染色的时候,APC和APC-CY7这两个颜色染得细胞还算分的清楚,做第二套染色,这两个颜色的细胞就是聚在了一起,我不知道为什么这样,如果硬要把两群细胞分开,补偿就超过了100。这两张图都同一个样本,是胸水细胞。我就开始怀疑是不是我的电压调的不合理,但是我又是新手,不太知道每个通道的最佳电压是什么。
第一套染色电压:FITC:512  PE:412 PECY5:659  APC:659 APCCY7:610
第二套染色电压:FITC:600  PE:555 PECY5:643  APC:580 APCCY7:550 PECY7:648
我把第二套染色的电压调的和第一套染色的电压一样,还是出现补偿过大的问题。这两张图都是在其他通道的补偿都调好的情况下的。麻烦老师帮我看看。

第二套染色

第二套染色

第一套染色

第一套染色
发表于 2019-1-4 08:08:45 | 显示全部楼层
串联染料,补偿和电压不通用,不要说是不同种类抗体,即使是同一种抗体不同批号,有时候补偿也需要微调。
 楼主| 发表于 2019-1-4 09:56:34 | 显示全部楼层
本帖最后由 当你老了 于 2019-1-4 09:58 编辑
niwanmao 发表于 2019-1-4 08:08
串联染料,补偿和电压不通用,不要说是不同种类抗体,即使是同一种抗体不同批号,有时候补偿也需要微调。 ...

老师,我把补偿调到了100多才把那两群细胞分开,但是这个图片显示的怪怪的……(因为每个标本都是一样的情况,所以我就选了最容易看出来补偿调的异常的图了)

异常补偿

异常补偿

正常补偿

正常补偿
发表于 2019-1-5 09:48:31 | 显示全部楼层
你的第二套方案可能是APC-Cy7通道的电压偏大,你可以尝试把这个通道电压降一点看看
发表于 2019-1-8 11:25:25 | 显示全部楼层
有可能是APC-CY7串联染料有APC信号所以不好调补偿
发表于 2019-1-8 15:05:45 | 显示全部楼层
当你老了 发表于 2019-1-4 09:56
老师,我把补偿调到了100多才把那两群细胞分开,但是这个图片显示的怪怪的……(因为每个标本都是一样的情 ...

这个问题其实就是涉及到荧光素的搭配,这就证明了CD45RA APC和CD8 APC-Cy7这两个抗体搭配上存在问题,需要更换其中一个抗体的荧光素。
发表于 2019-1-8 19:51:01 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-1-4 08:08
串联染料,补偿和电压不通用,不要说是不同种类抗体,即使是同一种抗体不同批号,有时候补偿也需要微调。 ...

不通用是什么意思呢?
您需要登录后才可以回帖 登录 | 加入流式中文网

本版积分规则

关闭

本站推荐上一条 /1 下一条

流式中文网    

联系我们: mail#flowcyto.cn (#改为@)

GMT+8, 2019-1-16 23:02

Powered by Discuz! X3.2

© 2001-2013 Comsenz Inc.