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[流式protocol] OMIP-043:分析人的抗体分泌细胞

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发表于 2019-1-7 22:37:52 | 显示全部楼层 |阅读模式

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抗体分泌细胞(ASC)是分化成熟的B细胞,它们是体液免疫的主要参与者,因为它们能合成并分泌结合并中和外来抗原的高度特异性抗体。这些细胞存在于初级和次级淋巴组织以及外周循环中,并且它们的表型可根据其所处组织不同而变化。
ASCs在外周血中以比例非常低,在扁桃体、脾脏和骨髓中略多,但通常还是被认为是稀有细胞,这使得对ASC的研究成为难题。当使用流式细胞术表征这些细胞时,必须注意收集足够的事件数量。根据Poisson分布,以5%的变异系数(CV)为例,要获得有意义的表型数据,ASC门中需收集400-2,000个事件。

ASC最重要的标志是免疫球蛋白的合成和分泌,ASC还表达非常高水平的CD38,并且TNF家族受体CD27阳性。一般用CD38 high、CD27+即可圈出ASC,继而分析其表型。

方案
方案比较简单,CD20、CD27、CD19、CD38、CD138都是用于确定ASC的标记;CD3/CD14/CD15/CD193则是排除性标记,同一个通道,以排除其它系列细胞的干扰;Fixable Blue是一种可固定的商品化死活染料;IgM、IgG、IgA染胞内,确定ASC表达的球蛋白类型;Ki67确定ASC增殖情况:
2019010801.png

设门
通过Time参数图,确定液流稳定区域:
2019010802.png

通过死活染料,排除死细胞:
2019010803.png

排除碎片:
2019010804.png

利用SSC-A/SSC-W排除粘连体:
2019010805.png

利用FSC-A/FSC-W排除粘连体:
2019010806.png

利用CD3/CD14/CD15/CD193 BV510这个Dump组合,排除其它细胞干扰:
2019010807.png

最后圈中CD27+CD38+++的ASC:
2019010808.png

最后,对ASC的胞内Ig类型、CD19、Ki67、HLA-DR进一步分析,下图是PBMC、骨髓、脾脏、扁桃体4个部位的ASC表型,可以看的出来不同部位的ASC表型上会存在一定差异。
2019010809.png

平时,我们大多关注了T细胞亚群、B细胞亚群,但是对体液免疫最关键的效应细胞ASC却关注甚少,现在是否应该好好做做研究看?

参考文献:Carrell J, Groves CJ. OMIP-043: Identification of human antibody secreting cell subsets. Cytometry A. 2018 Feb;93(2):190-193.

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发表于 2019-1-12 00:57:24 | 显示全部楼层
好贴!!!谢谢老师分享!
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