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[淋巴细胞相关] 求问大佬,我染的细胞群为何看不到淋巴细胞?

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发表于 2019-1-7 23:14:03 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
之前做胞外染色,都能明显看到淋巴细胞群,如图1. 屏幕截图(386).png
现在换到测测胞内:就是先消化成单细胞,四联激活阻断6~12小时,再洗掉,染胞外(同之前染色方案),接着破膜固定,染胞内,最后上机检测。现在几十个数据都看不到淋巴细胞群,如图2. 屏幕截图(387).png
跪求问大佬,究竟会是出错在什么地方?

发表于 2019-1-8 09:57:32 | 显示全部楼层
固定、破膜之后,FSC和SSC会发生明显改变,所以必须要用淋巴细胞特异性抗体设门。
 楼主| 发表于 2019-1-8 14:10:07 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-1-8 09:57
固定、破膜之后,FSC和SSC会发生明显改变,所以必须要用淋巴细胞特异性抗体设门。 ...

谢谢ni老师。我老师说固定破膜虽然会改变,但是不至于没有分群,我固定破膜也做出几例和图1差不多的。
发表于 2019-1-8 15:01:22 | 显示全部楼层
蒋佳焕 发表于 2019-1-8 14:10
谢谢ni老师。我老师说固定破膜虽然会改变,但是不至于没有分群,我固定破膜也做出几例和图1差不多的。 ...

有可能出现的,不是每个样本都一样。有些样本本来就分群不太清,固定破膜之后就会更加不清。
 楼主| 发表于 2019-1-9 14:53:52 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-1-8 15:01
有可能出现的,不是每个样本都一样。有些样本本来就分群不太清,固定破膜之后就会更加不清。 ...

谢谢ni老师。那么对于这种样本,是不是每次固定破膜之前都要染CD45,便于之后分群呢?
发表于 2019-1-10 09:12:32 | 显示全部楼层
蒋佳焕 发表于 2019-1-9 14:53
谢谢ni老师。那么对于这种样本,是不是每次固定破膜之前都要染CD45,便于之后分群呢? ...

推荐染。
发表于 2019-1-11 14:52:34 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-1-8 09:57
固定、破膜之后,FSC和SSC会发生明显改变,所以必须要用淋巴细胞特异性抗体设门。 ...

倪老师,
有很多文献做M2型巨噬细胞的直接就是CD11b+,F4/80+,Ly6G-,CD206+这样子,不用CD45进行标记也是接受的吗?还是说中性粒细胞,巨噬细胞,单核细胞等只需要CD11b+就可以了?谢谢。
发表于 2019-1-12 18:55:38 | 显示全部楼层
marvelwong 发表于 2019-1-11 14:52
倪老师,
有很多文献做M2型巨噬细胞的直接就是CD11b+,F4/80+,Ly6G-,CD206+这样子,不用CD45进行标记也 ...

分群清楚,当然不用也行。但如果分不开,死活染料也没染,此时还不染CD45,数据就完全不可信。

文献也是需要鉴别的,有些文献上的方法都是非流式专业的人做的,甚至有些就是假的
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