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[结构和原理] 流式补偿问题

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发表于 2019-2-15 19:10:48 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
              使用仪器是BD Canto plus,补偿设置使用的是补偿微球,仪器自动设置补偿。             发现的问题是:
                                 AF700和AF647的补偿是 AF700-AF647是96%,电压具体值记得不是很清楚,大概是AF700是400多,AF647是500多
                                  实际上样本时发现,设置了AF647通道的FMO,但是参照FMO设门的话会圈入比较多的阴性,与主观设门要差别很大。
                                  不知道是否是补偿设置或者是电压设置的问题,如果不是的话,FMO为什么会失去设门的意义呢?



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 楼主| 发表于 2019-2-15 19:11:53 | 显示全部楼层
希望可以得到各位老师的解答,谢谢!
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发表于 2019-2-15 21:54:30 | 显示全部楼层
需要看到数据才能判断。
FMO对设门帮助不大的情况,大多数是背景非特异性荧光太强,FMO主要是为了解决荧光渗漏的,背景荧光或死活细胞等原因引起的非特异性荧光无法排除。
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 楼主| 发表于 2019-2-16 08:10:38 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-2-15 21:54
需要看到数据才能判断。
FMO对设门帮助不大的情况,大多数是背景非特异性荧光太强,FMO主要是为了解决荧光 ...

1:那如果不讨论FMO,只看补偿设置的话,AF700和AF647的补偿会有这么高吗?
2:我们封闭使用的是小鼠血清和人IgG,死活染料也染了,背景荧光是否可能是补偿过高引起的呢?
之前也学习了老师的其他帖子,提到过不适合的电压引起的高补偿,然后才想到FMO设门不适合会不会是因为电压和补偿调节的不合适引起的。
数据是指补偿数据还是散点图呢?
非常感谢老师的解答。
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发表于 2019-2-16 13:11:57 | 显示全部楼层
cpu北极熊 发表于 2019-2-16 08:10
1:那如果不讨论FMO,只看补偿设置的话,AF700和AF647的补偿会有这么高吗?
2:我们封闭使用的是小鼠血清 ...

我目前做的这些数据这两个通道之间没看到这么高补偿,但是不排除你那边电压设置不合理、仪器的滤光片设置不同等原因导致这么高的补偿。

背景荧光有很多因素,Fc非特异性结合、死细胞以外,还有细胞内部颗粒、色素等非特异性荧光影响甚大。
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