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[结构和原理] 调补偿时,如果有阳性群有两个,应该选择哪一群调节补...

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发表于 5 天前 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
在做流式的时候,有的marker对应的阳性群明显的有两群,那么在选择marker的过程中,应该选择哪一群作为阳性群呢?有没有什么讲究。
例如CD44 marker,有明显的阴阳两群细胞,在flowjo或者diva软件上,从histogram图上的线性门 选择阳性细胞时,是把所有的阳性细胞都圈上,还是只圈某一群?
如下图所示。

CD44单阳管

CD44单阳管

negtive管

negtive管
 楼主| 发表于 5 天前 | 显示全部楼层
假如选择高阳性群作为标准,那么对于低阳性群肯定就是补偿过当的,如果选择低阳性群,补偿对于高阳性群肯定就是补偿不足,就算选择中间的话,对于两边的细胞均不是恰当补偿,那么应该怎么办呢?
发表于 4 天前 | 显示全部楼层
选高的就行,这个主要是看两个通道之间的overlap, 求一个百分比, 所以如果这两个都是真实信号的话,理论上对其他通道的overlap都一样,选高的可以让误差小一点。但如果有一个是自发荧光之类的假信号,那就不一样了,需要谨慎排除。
发表于 4 天前 | 显示全部楼层
immunology 发表于 2019-3-15 21:39
假如选择高阳性群作为标准,那么对于低阳性群肯定就是补偿过当的,如果选择低阳性群,补偿对于高阳性群肯定 ...

如果确实存在像你说的这种情况,那么说明这里面肯定有非荧光渗漏因素在里面,例如@robert1988 所说的一些非特异性荧光,我们平时临床免疫分型也碰到过类似情况,由一些死细胞引起。
所以要找最高、且特异性高的阳性群调节补偿。
发表于 4 天前 | 显示全部楼层
嗯 要结合FSC/SSC 的门看看啥样,尽量看点图来调补偿, 峰图不清楚的,而且也不准确
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