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常说流式没法诊断慢粒,这里有一个简单的新指标:CD26+LSC

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发表于 2019-3-18 21:45:53 | 显示全部楼层 |阅读模式

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慢性粒细胞白血病(CML)是一种骨髓增生性疾病,其特征在于CML患者的外周血(PB)和骨髓(BM)中未成熟髓系细胞的恶性增殖,而分化能力却仍保留着。 其发病率为每10万名成人1~2例,占新诊断白血病病例的约15%。 CML是分子水平上特征就是费城染色体(Ph)和BCR-ABL1融合蛋白,95%的CML患者存在t(9;22)(q34; q11)。

CML诊断通常需要细胞遗传学分析Ph染色体,或通过荧光原位杂交(FISH)或通过分子研究的BCR-ABL1异常。 然而,在某些情况下,可能难以将CML与可能含有BCR-ABL1融合基因的其他骨髓增生性疾病或骨髓增生异常综合征区分开,而且,细胞遗传学和分子分析都偏贵并且需要数天才能完成。
曾经,Bethesda共识将CML列为流式诊断血液肿瘤的禁区,因为此类异常的成熟粒细胞在表型上与正常相差无几,没法通过表型区分开。我在2013年曾经发表过《Discrimination of malignant neutrophils of chronic myelogenous leukemia from normal neutrophils by support vector machine. 》,利用支持向量机结合几个免疫标记,在多维角度进行区分,得到95%左右的特异度和灵敏度,但是在实际应用中,还是存在较大的障碍,因为建模需要较多正常和CML样本,耗费时间较长,判断时需要将数据导出为特殊的文本格式。

2019年2月份,意大利的Donatella Raspadori等人在《Flow Cytometry Assessment of CD26+ Leukemic Stem Cells in Peripheral Blood: A Simple and Rapid New Diagnostic Tool for Chronic Myeloid Leukemia.》一文中,给我们带来了一个新指标:CD26+白血病干细胞(LSC,Leukemia Stem Cell),设门也非常简单,就是圈中CD34+CD38-的LSC(正常HSC表型为CD34+CD38+),分析其中CD26的表达率,见下图,其中f图为CD26的同型对照,g图为CD26表达率,这是一例临床疑诊CML的患者:
2019031901.png


测试结果看上去还不错,作者检测了243名疑诊CML的白细胞增多患者的外周血 CD26 + LSCs,发现211/243存在CD26阳性表达,随后通过FISH和RT-PCR确认211/211(100%)为BCR-ABL1阳性;而那32个CD26阴性的样本,在传统的细胞遗传学和分子检测后,没有一个是CML。 在评估CD26 + LSCs阳性的211个样本中,CD34+CD38-LSC中CD26+表达率的中位百分比为37.99%(范围1.11-99.85),CD26 + LSCs绝对数的中位数为10.46×10E9/L(范围0.010~1037×10E9/L)。
流式中文网注:看到上面这两个数据,我有点奇怪,首先堂堂的Cytometry B杂志里面,居然把小数点表示为英文逗号,我这里暂且将其改回来。其次明明说211例均为CD26阳性,但是表达范围却是从1.11开始,难道他们不是以百分比判断,而是以有无表达来判断?所以对此文章暂且保留一点疑问,在临床实际案例中我们测试起来,看看效果,究竟是老外造假?还是真有这么好的指标?

流式诊断白血病和淋巴瘤的道路,虽然与其它应用相比最成熟,但还是有很多工作需要做。

发表于 2019-3-20 15:07:41 | 显示全部楼层
CD34+CD38-LSC中CD26+表达率的中位百分比为37.99%(范围1.11-99.85)。。。范围1.11开始,神奇。
 楼主| 发表于 2019-3-20 21:31:49 | 显示全部楼层
btx362237729 发表于 2019-3-20 15:07
CD34+CD38-LSC中CD26+表达率的中位百分比为37.99%(范围1.11-99.85)。。。范围1.11开始,神奇。 ...

而且原文中是用逗号,而不是用小数点。
1,11-99,85
所以我觉得很奇怪,这样的文章也发出来了,而且是流式专业的权威杂志。
发表于 2019-3-22 10:27:28 | 显示全部楼层
有一个问题,之前看到 有书籍说,急性白血病患者外周血中CD45会降低表达,自己也做过实验,仅GATE淋巴细胞群的B淋巴细胞(CD19)60%,GATE    CD45阳性的细胞群,B淋巴细胞有90%以上,请问这个时候用CD45来圈门还合适吗?

 楼主| 发表于 2019-3-22 12:23:38 | 显示全部楼层
特勒兮兮 发表于 2019-3-22 10:27
有一个问题,之前看到 有书籍说,急性白血病患者外周血中CD45会降低表达,自己也做过实验,仅GATE淋巴细胞 ...

不太理解这个意思。
CD45/SSC散点图上,原始细胞都在中间这个区域,本就应该用CD45/SSC设门的。
发表于 2019-3-22 15:08:47 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-3-22 12:23
不太理解这个意思。
CD45/SSC散点图上,原始细胞都在中间这个区域,本就应该用CD45/SSC设门的。 ...

我的意思是看到有流式书上说,急淋病人外周血中CD45会降低表达,所以用CD45圈的淋巴细胞是不是不完全是体内的淋巴细胞。
发表于 2019-3-22 15:19:00 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-3-22 12:23
不太理解这个意思。
CD45/SSC散点图上,原始细胞都在中间这个区域,本就应该用CD45/SSC设门的。 ...

为啥上传不了图片,要输入链接地址????
 楼主| 发表于 2019-3-23 10:18:53 | 显示全部楼层
特勒兮兮 发表于 2019-3-22 15:08
我的意思是看到有流式书上说,急淋病人外周血中CD45会降低表达,所以用CD45圈的淋巴细胞是不是不完全是体 ...

这个帖子是说CML的,你讨论到急淋去了

急淋病人CD45降低,这个说法就不严谨,准确地说是急淋病人那些白血病细胞的CD45表达,和其正常的细胞相比是降低的。但这个只是大多数病人,有少数T-ALL的白血病细胞CD45是不降低的。
上面是一个概念问题,回到你的实验目的,从另一个帖子看出来你的实验目的是想圈正常淋巴细胞,那么大多数情况下是可以用CD45/SSC圈淋巴细胞区域,是可以排除掉白血病细胞,准确圈中正常淋巴细胞的,但为了保险起见,建议加用CD34等标记排除掉白血病细胞。
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