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[标本处理] 小鼠脾脏CD8T细胞活化后染ifng Gzmb 可以不加刺激剂吗

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发表于 2019-3-30 19:17:46 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
我用磁珠分选出小鼠CD8 T细胞,CD3 CD28抗体(5ng/ml)活化3天后固定破膜染ifng tnfa gzmb,发现不加刺激剂也能染出ifng(大约20%)和gzmb(大约80%)。ifng的分群还是蛮明显的。请问这种情况正常吗?这种实验条件下,是否真的不需要加刺激剂呢?
其实我是忘加了.....想试一下能不能染出

发表于 2019-3-31 19:17:02 | 显示全部楼层
不刺激可以有少量,但这么高肯定不正常。
发表于 2019-7-7 10:18:47 | 显示全部楼层
你应该是操作protocol的问题,比如有的人BFA(1×))PMA(5ng/nl)+Ionomycin(1ug/ml)刺激4hr;有个别人提前加入BFA,导致胞内因子全部高表达甚至达90%,而且CD8细胞一般分泌Granzyme B比较猛,分泌TNFa 高于IFNr,约高20%,建议刺激时间改为1.5-2hr。

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