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OMIP-050:单管28色/30参数方案检测不同亚群免疫检查点分子

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发表于 2019-4-22 23:08:47 | 显示全部楼层 |阅读模式

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尽管预测治疗成功的标志物仍然定义不明确,但免疫疗法在某些实体肿瘤治疗中的益处还是显而易见的。
由于肿瘤细胞大多采用多种免疫逃避机制,因此,囊括尽可能多的检查点抑制标志物,或许能找出预测参数。
美国Nettey L等人设计了一个方案《OMIP-050: A 28-color/30-parameter Fluorescence Flow Cytometry Panel to Enumerate and Characterize Cells Expressing a Wide Array of Immune Checkpoint Molecules.》,将T细胞亚群和分化标记物,连同十余个免疫检查点治疗靶点,搭配成28色/30参数的方案,以实现全面监测免疫治疗的反应。
淋巴细胞受一系列共刺激和共抑制受体的调节,这些受体都可以被免疫疗法靶向结合。阻断共抑制/检查点分子CTLA-4和PD-1为一部分实体瘤患者提供了持久的临床益处,其他检查点分子,包括TIM3、2B4和TIGIT,也可从高免疫抑制性肿瘤微环境中去除T细胞的“制动”因素,另外还有正在研发的共刺激受体的激动剂,包括ICOS、OX40、GITR、CD27和4-1BB,以加强淋巴细胞活化。
由于某些记忆T细胞亚群,如中央记忆(Tcm)和T辅助1型(Th1),与临床受益相关,并且最近有研究发现表达CD103的组织驻留T细胞能产生强烈而快速的效应,并募集其它淋巴细胞。因此,有必要区分出各类T淋巴细胞亚群及其分化状态,进而检测其中的检查点标记表达水平。
方案
这里各个检查点抗体克隆号值得参考下。方案中除了检查点分子以外,还有活化相关标记(如CD69、HLA-DR)和与免疫细胞转运相关的标记(CD183、CD186)。
2019042301.png
设门和分析
圈出CD45+活细胞之后,通过CD3+圈出T细胞,根据CD4/CD8分出CD4+T和CD8+T,分别看两个亚群的分化状态(CD25/CD127、CD27/CD57、CD95/CCR7),最后,结合CD45RO和各检查点分子组成散点图矩阵,看两个亚群中的记忆状态和检查点分子表达情况,其中分群不清的检查点分子均与对照(绿色等高线,只加系列特异性染料、死活染料和分化标记)叠加,以确定表达情况。
2019042302.png
如此高通量的分化、活化、抑制等信号分子,提供了相当丰富的信息,可能帮助临床找出免疫治疗反应良好的患者特征。
由于大多数FLOWER的仪器都不是这么高的配置,所以可以考虑以CD45、死活染料、CD3、CD4、CD8、CD45RO这几个为骨架抗体,将其它标记拆分开搭配成多管方案。

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发表于 2019-4-23 10:35:38 | 显示全部楼层
单管28色要什么流式仪才能做得了啊?
 楼主| 发表于 2019-4-23 11:29:15 | 显示全部楼层
ET生物人 发表于 2019-4-23 10:35
单管28色要什么流式仪才能做得了啊?

28色的仪器,很多年前就有了,前几年BD不是发了一款50多色的机器吗
发表于 2019-4-23 16:08:03 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-4-23 11:29
28色的仪器,很多年前就有了,前几年BD不是发了一款50多色的机器吗

一般流式仪都是3激光的
 楼主| 发表于 2019-4-23 22:33:32 | 显示全部楼层
ET生物人 发表于 2019-4-23 16:08
一般流式仪都是3激光的

3根以上激光的机型还是不少的。
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