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[功能检测] 做细胞周期的流式前处理的有关问题

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发表于 2019-4-27 18:58:07 | 显示全部楼层 |阅读模式

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老师,您好,关于细胞周期我有几个问题。我现在做的是造血分化方面,使一种白血病细胞向巨核系分化,出现几个问题。

1.收细胞的时候,觉得细胞很多,但是经过75%乙醇过夜处理之后,离心之后细胞沉淀就会很少并且很虚,所以想问的是:75%的乙醇过夜处理,破的膜是细胞膜还是核膜还是都破,是怎么破膜的?如果通俗来讲是在膜上留下洞,方便PI染料进入吗?还是其他的方式呢?

2.有老师说乙醇固定之后,细胞会特别脆,容易破碎,因为我们需要检测的是完整的细胞核,所以离心的速度最大可以达到多大呢?我们一般是1000rpm/min

3.在用RNAase消化的时候,我们采用的是37度孵育箱孵育,而并不是水浴,会对结果产生影响吗?

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发表于 2019-4-28 16:31:15 | 显示全部楼层
你要提取细胞核的话,给你推荐一个配方:
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 楼主| 发表于 2019-4-28 20:19:01 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-4-28 16:31
你要提取细胞核的话,给你推荐一个配方:
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老师,我们不是提取细胞核的,我们也是做细胞周期的,看二倍体向四倍体,八倍体的分化过程,只是不明白75%固定过夜究竟是破的哪个膜?
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发表于 2019-5-2 23:27:58 | 显示全部楼层
楚雪菡 发表于 2019-4-28 20:19
老师,我们不是提取细胞核的,我们也是做细胞周期的,看二倍体向四倍体,八倍体的分化过程,只是不明白75 ...

乙醇对胞膜和核膜都会影响的。
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 楼主| 发表于 2019-5-3 15:10:03 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-5-2 23:27
乙醇对胞膜和核膜都会影响的。

好的,谢谢老师。
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