查看: 272|回复: 4
收起左侧

[淋巴细胞相关] 关于CFSE检测淋巴细胞增殖的几点问题

[复制链接]
发表于 2019-5-6 16:45:00 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
实验目的是探究LPS对两种小鼠wt,ko的脾脏B淋巴细胞增殖的影响,方法是将脾脏研磨裂红以后染CFSE并用LPS刺激,然后圈门CD19去看CFSE的histogram。现在发现当加了LPS刺激以后,从48h开始就有大量细胞死亡,我怀疑是不是淋巴细胞活化诱导的细胞死亡AICD,现在分析CFSE的话,我怎么在FSC-SSC圈门呢,因为72h细胞在FSC-SSC图上基本都是死细胞了。还是我不圈淋巴细胞群了,直接上来就画CD19的阳性群,然后在CD19中分析CFSE?


做CFSE必须要做在活细胞内圈门吗?
上图: ko.png

问题2:分析CFSE的时候是不是收的细胞数越多越好?我发现收1万个细胞和10万个细胞,峰的趋势有差异,好像收的细胞越多,峰的趋势就会被掩盖。

十万

十万

一万

一万
看纵坐标,第一个图收的细胞数是第二个的10倍。
收多少细胞有没有一个建议量?如果收的细胞少了会不会不能反映真实情况?

发表于 2019-5-6 19:15:52 | 显示全部楼层
1、是否加个Live/dead会比较好?
2、细胞数肯定多点好,之所以有这个差异,是否因为获取的时候流速发生了改变?或液流不稳定造成CV大?
 楼主| 发表于 2019-5-6 19:31:05 | 显示全部楼层
本帖最后由 immunology 于 2019-5-6 19:35 编辑
niwanmao 发表于 2019-5-6 19:15
1、是否加个Live/dead会比较好?
2、细胞数肯定多点好,之所以有这个差异,是否因为获取的时候流速发生了改 ...

通过FSC-SSC图应该可以初步判断live/dead了吧?您的意思是这样不是太准?流速始终用一个medium速度收的,流速稳定不稳定怎么看呢,我通过横坐标为time,纵坐标histogram观察了一下,基本是平的。 time.png
发表于 2019-5-7 07:45:04 | 显示全部楼层
immunology 发表于 2019-5-6 19:31
通过FSC-SSC图应该可以初步判断live/dead了吧?您的意思是这样不是太准?流速始终用一个medium速度收的, ...

FSC/SSC这个判断不够准,否则咱们就没必要用死活染料了,是吧:)
time参数和FSC组合起来看散点图会更好一点。如果用直方图,你可以分别圈出不同时间段的,看看前面那个CFSE峰的变化
 楼主| 发表于 2019-5-18 21:50:59 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-5-7 07:45
FSC/SSC这个判断不够准,否则咱们就没必要用死活染料了,是吧:)
time参数和FSC组合起来看散点图会更好 ...

对于判断液流稳定性用time和FSC组合图的原理还是不太懂,FSC在任一时间段应该高低都有吧,因为每群细胞大小不一样,在FSC-time图上怎么看液流稳定性呢?  
另外老师您说的“如果用直方图,你可以分别圈出不同时间段的,看看前面那个CFSE峰的变化“这句话也不太懂。
您需要登录后才可以回帖 登录 | 加入流式中文网

本版积分规则

流式中文网    

联系我们: mail#flowcyto.cn (#改为@)

GMT+8, 2019-9-15 21:37

Powered by Discuz! X3.2

© 2001-2013 Comsenz Inc.