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[标本处理] 求助:细胞周期两个峰很宽,分不开是什么原因

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发表于 2019-5-15 19:17:05 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
做了很多次细胞周期,结果一直不理想。两个峰很宽,分不开步骤:
冷PBS洗两遍,消化,800rpm 6min离心
弃上清,冷PBS洗一遍,800rpm 6min离心
弃上清,轻弹管底,加入125微升PBS混匀,再加入375微升冷无水乙醇。-20度固定48小时、
配置PI染液,PI 50ug/mL,0.1% Triton,加RNA酶,冰上孵育20min,检测


1.png
发表于 2019-5-16 09:59:44 | 显示全部楼层
1 你用试剂盒做的? 冰上20分钟?
2 把流式上怎么设么门的图传上来看下。
3 可以尝试把电压加大点  比如第一个锋调到50 chanl ,再看第二锋就更好些
发表于 2019-7-12 10:23:42 | 显示全部楼层
PI做周期是用2通道吗?
发表于 2019-7-13 16:38:47 | 显示全部楼层
justletitflow 发表于 2019-7-12 10:23
PI做周期是用2通道吗?

大多数机器用FL2,少数机器会用FL3,主要是看机器滤光片的配置。
发表于 2019-7-16 23:52:20 | 显示全部楼层
近期我同事做的细胞周期的图以BD自带的分析软件分析也是这么奇怪,用的是LM3肝癌细胞系做的,试剂盒说明书是我给他找的理应没问题的,试剂盒是索莱宝的,先是4° 75%预冷乙醇固定2h乃至过夜,pbs洗,RNA酶,PI染色。第一个峰我一般调到50左右,帮别人上了几次都是正常的周期图到他这就跟你图片这很像
发表于 2019-7-17 10:39:14 | 显示全部楼层
Smile14 发表于 2019-7-16 23:52
近期我同事做的细胞周期的图以BD自带的分析软件分析也是这么奇怪,用的是LM3肝癌细胞系做的,试剂盒说明书 ...

有时候同样一个Protocol,不同的人做出来就是不一样,后来发现问题都在细节上面
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