查看: 83|回复: 4
收起左侧

[标本处理] 肿瘤样品处理问题

[复制链接]
发表于 2019-6-6 10:43:03 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
请教一下,我最近做肿瘤组织的流式,测TIL、TAM等指标,从处理完样品到上机时间间隔太长,导致最后上机时细胞基本结块成絮状,吹打或涡旋都不能使其完全散开,收集细胞时目标细胞也很少,样品跑干了都不够。第二天我用剩下的肿瘤细胞悬液(放在4℃保存),再次孵育抗体后去上机检测,发现收集目标细胞的速度变快了,平均1、2分钟一个样。
后期我分析,可能分细胞时密度太大导致细胞团聚结块。但是两次处理细胞密度都挺大,而且也都放置过夜了,唯一区别是有无抗体,不知道孵育完抗体会不会对细胞活性有影响?为什么结块这么严重?
麻烦各位老师指点一二,感激不尽!!

发表于 2019-6-7 08:29:08 | 显示全部楼层
处理完之后,长时间不上,可能是缓冲液问题,细胞死亡了。
 楼主| 发表于 2019-6-7 13:52:53 | 显示全部楼层
谢谢倪老师,嗯,我就是用的PBS重悬,没加其他东西,所以加FBS或者BSA会好点么,或者用公司的那种stainning buffer。
发表于 2019-6-9 15:05:51 | 显示全部楼层
言西早 发表于 2019-6-7 13:52
谢谢倪老师,嗯,我就是用的PBS重悬,没加其他东西,所以加FBS或者BSA会好点么,或者用公司的那种stainning ...

两个办法:
1、用你说到是含BSA的PBS,延长时间不会太长,对细胞形态保持较好。
2、用1~2%多聚甲醛固定,可以保存较长时间,但是对细胞FSC和SSC会有影响。少数抗原可能会影响,需验证后使用。
 楼主| 发表于 2019-6-10 10:24:15 | 显示全部楼层
好的,谢谢倪老师!!
您需要登录后才可以回帖 登录 | 加入流式中文网

本版积分规则

关闭

本站推荐上一条 /1 下一条

流式中文网    

联系我们: mail#flowcyto.cn (#改为@)

GMT+8, 2019-6-20 10:56

Powered by Discuz! X3.2

© 2001-2013 Comsenz Inc.