肿瘤样品处理问题

言西早 · 发表于 2019-6-6 10:43:03

请教一下，我最近做肿瘤组织的流式，测TIL、TAM等指标，从处理完样品到上机时间间隔太长，导致最后上机时细胞基本结块成絮状，吹打或涡旋都不能使其完全散开，收集细胞时目标细胞也很少，样品跑干了都不够。第二天我用剩下的肿瘤细胞悬液（放在4℃保存），再次孵育抗体后去上机检测，发现收集目标细胞的速度变快了，平均1、2分钟一个样。
后期我分析，可能分细胞时密度太大导致细胞团聚结块。但是两次处理细胞密度都挺大，而且也都放置过夜了，唯一区别是有无抗体，不知道孵育完抗体会不会对细胞活性有影响？为什么结块这么严重？
麻烦各位老师指点一二，感激不尽！！

niwanmao · 发表于 2019-6-7 08:29:08

处理完之后，长时间不上，可能是缓冲液问题，细胞死亡了。

言西早 · 发表于 2019-6-7 13:52:53

谢谢倪老师，嗯，我就是用的PBS重悬，没加其他东西，所以加FBS或者BSA会好点么，或者用公司的那种stainning buffer。

niwanmao · 发表于 2019-6-9 15:05:51

言西早发表于 2019-6-7 13:52
谢谢倪老师，嗯，我就是用的PBS重悬，没加其他东西，所以加FBS或者BSA会好点么，或者用公司的那种stainning ...

两个办法：
1、用你说到是含BSA的PBS，延长时间不会太长，对细胞形态保持较好。
2、用1~2%多聚甲醛固定，可以保存较长时间，但是对细胞FSC和SSC会有影响。少数抗原可能会影响，需验证后使用。

言西早 · 发表于 2019-6-10 10:24:15

好的，谢谢倪老师！！

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