血液检测TH1细胞可否先裂解红细胞再加入刺激因子进行孵育

h951595223

最近在做大鼠和小鼠th1 th2等细胞的检测，在样本制作过程中发现小鼠血液在加入刺激因子Cell Activation Cocktail (with Brefeldin A)孵育4小时之后，加入胞外抗体CD3CD4染色之后，红细胞难裂解，对后面操作有些影响，试了几次都出现这种情况，因此，我试了先把红细胞裂解，清洗之后再加入刺激因子孵育，之后进行染色固定破膜等操作，不知道先裂解红细胞在进行孵育是否可以，对结果是否有比较大的影响，请各位前辈指点一下

niwanmao

全血刺激？一般不是都先提取pbmc吗？

h951595223

niwanmao 发表于 2019-6-19 16:06
全血刺激？一般不是都先提取pbmc吗？

倪老师，我们一直都是用100ul的血液加入100ul的1640培养基，然后加入1ul Cell Activation Cocktail (with Brefeldin A)250×进行孵育，胞内检测必须先提取PBMC吗？先提取PBMC结果会更好吗？我查询到的资料和书上并没有要求这个，我查询的资料都是血液和培养基混合之后加入刺激因子孵育

niwanmao

h951595223 发表于 2019-6-20 15:22
倪老师，我们一直都是用100ul的血液加入100ul的1640培养基，然后加入1ul Cell Activation Cocktail (with ...

红细胞不去掉，刺激效果会比较差。

h951595223

niwanmao 发表于 2019-6-20 15:58
红细胞不去掉，刺激效果会比较差。

小鼠血液较少，分离PBMC有些困难，倪老师，我可以直接裂解红细胞，收集裂解之后的细胞进行刺激做检测吗

niwanmao

h951595223 发表于 2019-6-21 15:49
小鼠血液较少，分离PBMC有些困难，倪老师，我可以直接裂解红细胞，收集裂解之后的细胞进行刺激做检测吗 ...

哦，你们用的是小鼠的，那血量是少。可以裂解，但是裂解时间要注意，并且裂解液绝对不能含固定成份。

mybiosciences

没有完全裂解没有关系，后面的固定破膜就能完全裂解了
只是Cell Activation Cocktail 含有pma/离子霉素，这两个试剂绕开抗原识别，直接打开信号通路，建议作为阳性对照