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[结构和原理] 关于切碎片补偿微球和面积因子的问题

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发表于 2019-7-11 10:14:11 | 显示全部楼层 |阅读模式
5流星
在做多色实验建立模板的时候有一个问题一直比较困惑,在建立模板的时候,为了进一步提高信号准确度,一般都会调节面积因子,使各个荧光信号和前侧向信号的A和H的mean值保持一致,但是调过面积因子后,整个细胞群体会逐渐压缩在一起,为了不把细胞碎片和正常细胞压缩在一起,需要把FSC阈值调的比较高以完全切除碎片,但在使用补偿微球做补偿的情况下,高阈值会把微球群体也切掉,这种情况应该怎么办。机器是BD canto II。

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把A和H调到一致,好像没有必要吧,这样调了之后,虽然调宽了H,但反而把原来分布较宽的A给压窄了。
发表于 2019-7-11 10:14:12 | 显示全部楼层
把A和H调到一致,好像没有必要吧,这样调了之后,虽然调宽了H,但反而把原来分布较宽的A给压窄了。
发表于 2019-7-11 17:21:19 | 显示全部楼层
我不知道可不可以这样,微球调节补偿时调低FSC的阈值,获取样本时再调回来。
 楼主| 发表于 2019-7-12 10:04:53 | 显示全部楼层
我想成大牛 发表于 2019-7-11 17:21
我不知道可不可以这样,微球调节补偿时调低FSC的阈值,获取样本时再调回来。 ...

调完补偿后前面的参数已经不可修改了
发表于 2019-7-12 10:51:24 | 显示全部楼层
945860216xy 发表于 2019-7-12 10:04
调完补偿后前面的参数已经不可修改了

可是DIVA的补偿面板与阈值面板不在一起啊?阈值的变化会导致补偿的变化吗?
 楼主| 发表于 2019-7-15 10:20:51 | 显示全部楼层
我想成大牛 发表于 2019-7-12 10:51
可是DIVA的补偿面板与阈值面板不在一起啊?阈值的变化会导致补偿的变化吗? ...

是不在一起,但是模板应用了补偿后阈值这一栏变成不可修改状态了
 楼主| 发表于 2019-7-15 10:22:28 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-7-13 16:37
把A和H调到一致,好像没有必要吧,这样调了之后,虽然调宽了H,但反而把原来分布较宽的A给压窄了。 ...

额,这样啊。但是BD的操作说明书里推荐这一项,这个操作具体有什么好处呢,这样看来反而不如不调啊
发表于 2019-7-16 08:14:55 | 显示全部楼层
945860216xy 发表于 2019-7-15 10:22
额,这样啊。但是BD的操作说明书里推荐这一项,这个操作具体有什么好处呢,这样看来反而不如不调啊 ...

不要调。
发表于 2019-7-30 16:46:15 | 显示全部楼层

倪老师,您好!
请教您:最近做TBNK绝对计数,发现调整CD45-Percp-Cy5.5的域值后,微球的数量变化很大,这是什么原因?电压、补偿条件、微球管批号、试剂等完全一样的,没有设置其他通道的阈值,是同一个标本,就把CD45-Percp-Cy5.5的阈值降低后,发现微球数量明显减少,一直想不通为何,请倪老师指教,谢谢!
发表于 2019-7-30 21:12:47 | 显示全部楼层
maluqi 发表于 2019-7-30 16:46
倪老师,您好!
请教您:最近做TBNK绝对计数,发现调整CD45-Percp-Cy5.5的域值后,微球的数量变化很大, ...

阈值尽量用FSC。我以前也试过用荧光参数做阈值,发现信号会少很多。
另外,你可以把两个文件做出相同的散点图做一下对比。
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