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[结构和原理] 小鼠外周血淋巴细胞FSC-A SSC-A分群

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发表于 2019-8-5 14:26:40 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
倪老师,我是最近才开始做小鼠外周血淋巴细胞的划分鉴定,图中是我一开始在FSC-A SSC-A的分群,您看一下样品这样的分群正常吗? 我自己圈画的这一群细胞是否能代表所有的CD45+白细胞?因为是多色共染,目前手上没有合适的CD45+抗体,就没去做这个染色;细胞死活的染色后面可以尝试一下DAPI。图中有两个主群都有CD3e-FITC阳性细胞,我圈到的那一群CD3e细胞主群中也是CD19 B细胞的主群,我想问一下另外一个主群是否也是正常的细胞呢?

绿色为CD3e阳性信号

绿色为CD3e阳性信号
发表于 2019-8-6 22:49:42 | 显示全部楼层
建议在排除死细胞、排除粘连体之后,再看看FSC/SSC的分布,如果仍是如此,需考虑样本质量问题或处理上的原因了。
发表于 2019-8-7 22:51:13 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-8-6 22:49
建议在排除死细胞、排除粘连体之后,再看看FSC/SSC的分布,如果仍是如此,需考虑样本质量问题或处理上的原 ...

我认为他圈的是对的,但是不够典型。发一个我的图,红的群体包涵有人源化的免疫细胞。
Screenshot_20190807-224851.jpg
 楼主| 发表于 2019-8-13 22:24:39 | 显示全部楼层
    非常感谢倪老师以及qingshi的回答,最近重新做了几次,并同时做了去粘连信号和染死活以及CD45,圈门问题已经解决。但是鄙人现在还有一处困惑:
    我有的时候单核细胞以及粒细胞的主群会占比例很多,有的时候淋巴细胞群占比例很多,我的实验操作是,小鼠取血500ul左右于医用抗凝管,加入红细胞裂解液3~4 mL室温裂解10min,然后150-200g 4度离心5min,再次加入2mL裂解液重悬,室温静置裂解5分钟,再次离心后用含5% FBS的PBS重悬4度封闭,然后一抗孵育。
请问这样做是否会对细胞有影响?哪里操作容易造成细胞比例失调?
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