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[淋巴细胞相关] 请教各位老师怎么解决这个荧光溢漏的问题

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发表于 2019-8-12 00:17:44 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
做多色染色的时候发现有个抗体表达很怪异,就减掉一些,找原因。现在发现在当前补偿情况下,第4通道(Percp-Cy5.5)的荧光溢漏到了第5通道(PE-Cy7)和第6通道(APC),请问各位老师应该如何调整?
谢谢!

多色方案荧光溢漏

多色方案荧光溢漏


发表于 2019-8-12 09:15:43 | 显示全部楼层
我大概知道你用的机型了。这个光路设计上面,FL4也就是PC5.5得尽量放表达强度偏弱的抗体。
我估计你原来的方案可能是10个通道全满的,所以目前的解决方案:
1、分多管检测。
2、不介意的话,用斜向十字门或不规则门圈目标细胞群。
 楼主| 发表于 2019-8-12 11:02:01 | 显示全部楼层
谢谢倪老师,仪器是Navios三激光十色。我试着调整一下PC5.5的抗体。
另外我觉得我可能没有对这一管做对应的补偿。之前我只用补偿微球做了一个补偿,用到其他管中。估计Tandem染料要每管做补偿。
 楼主| 发表于 7 天前 | 显示全部楼层
倪老师,各位flower,我使用本管中的抗体染色补偿微球,针对这一管重新做了补偿,解决了荧光溢漏的问题。确实是偶联染料需要每管单独补偿。
但是现在又发现一个无法理解的现象。在有一管散点图中,发现圈门的细胞比例远高于目测的比例,请问下这是什么导致的?(见附图的下半部分)

重做补偿的效果和散点图问题

重做补偿的效果和散点图问题


发表于 7 天前 | 显示全部楼层
yuemin5 发表于 2019-8-14 22:30
倪老师,各位flower,我使用本管中的抗体染色补偿微球,针对这一管重新做了补偿,解决了荧光溢漏的问题。确 ...

这说明补偿并没有解决荧光渗漏的问题,虽然在图形上看着像已经解决了,但比例不对啊。
有时候,可以用不规则十字门分析的,因为有几个通道、有些抗体就是调不到横平竖直的。
 楼主| 发表于 6 天前 | 显示全部楼层
估计还是得换一下荧光通道
发表于 6 天前 | 显示全部楼层
像是FlowJo软件的问题,圈门后显示的比例与实际不符。
 楼主| 发表于 昨天 15:56 | 显示全部楼层
leiming319 发表于 2019-8-15 11:21
像是FlowJo软件的问题,圈门后显示的比例与实际不符。

莫非盗版软件有这个bug?
发表于 15 小时前 | 显示全部楼层
有的,碰到过几次
 楼主| 发表于 10 小时前 | 显示全部楼层
leiming319 发表于 2019-8-21 08:38
有的,碰到过几次

经验之谈,谢谢。我换个软件看看
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