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[标本处理] 小鼠外周血裂解后散点图淋巴细胞区有2群?

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发表于 2019-8-28 09:55:55 | 显示全部楼层 |阅读模式
5流星
本帖最后由 WJHUANG 于 2019-8-28 09:55 编辑

最近尝试一款红细胞裂解液(含固定剂)裂解小鼠全血,本来这款红细胞裂解液是针对人血的,因需要测试小鼠外周血样本故尝试裂解了一下,先采用FITC-CD3,apc-CD64,PE-CD11B标记全血,然后采用裂解液裂解全血1min,加PBS后离心,PBS清洗一次后上机检测。
结果发现裂解效果还行,但是淋巴细胞区却有2群细胞,不知道右边那一群是什么,血小板?而且比例还不低。求大神解惑
图片上可以看到,俩群细胞分群虽然相隔很近但还是很明显,且右边那群淋巴细胞比低很多,不知道是什么?

散点图 颜色为阳性标记,显示细胞类型.png
密度图,淋巴细胞区有两群,相隔近.png
拉大后对俩群画门.png
左边的一群(P4,CD3标记).png
右边的一群(P6,CD3标记).png
 楼主| 发表于 2019-8-28 10:01:07 | 显示全部楼层
求大神解惑,分群太奇怪了,而且分群还比较明显,染色也有差异。
发表于 2019-8-28 21:39:57 | 显示全部楼层
这样看来应该左侧这群才是淋巴,右侧这群只是有部分淋巴混入的单核吧
发表于 2019-8-29 09:40:20 | 显示全部楼层
我的人的PBMC也是这样分两群,但是我的以右侧群数量居多,请问最后圈淋巴细胞门是都圈呀,还是圈左侧群?
 楼主| 发表于 2019-8-29 10:37:03 | 显示全部楼层
Cleopatra 发表于 2019-8-29 09:40
我的人的PBMC也是这样分两群,但是我的以右侧群数量居多,请问最后圈淋巴细胞门是都圈呀,还是圈左侧群? ...

最好做个标记验证区分一下,可以用CD3标记一下,我之前人的也遇到过这个问题,后来增加时间就只有一群了,你是用的什么裂解的
 楼主| 发表于 2019-8-29 10:41:13 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-8-28 21:39
这样看来应该左侧这群才是淋巴,右侧这群只是有部分淋巴混入的单核吧

感觉不像是单核细胞,我用CD64标记的单核细胞,显示主要在上面一点,就是红色的部分。感觉像是另外一种淋巴细胞似的,CD3比例低很多
发表于 2019-8-29 10:42:53 | 显示全部楼层
我是用先密度梯度离心,然后再裂红,CD3marker是肯定会加,但是我需要加因子活化测胞内因子,最后上机的时候发现有两群,所以就不清楚是分的原因,还是加因子的原因。请问增加时间是增加多久呀?我裂红室温7min
发表于 2019-8-29 20:37:02 | 显示全部楼层
我也觉得ficoll离心后,再破红好点啊,不然一直裂一直有
 楼主| 发表于 2019-9-5 17:14:19 | 显示全部楼层
Cleopatra 发表于 2019-8-29 10:42
我是用先密度梯度离心,然后再裂红,CD3marker是肯定会加,但是我需要加因子活化测胞内因子,最后上机的时 ...

那应该是刺激后导致部分细胞活化,部分细胞没有,那样细胞很容易出现分群,我们这边做脾脏淋巴细胞经常会遇到,也有可能是死细胞,与活细胞分群。
 楼主| 发表于 2019-9-5 17:20:06 | 显示全部楼层
Cleopatra 发表于 2019-8-29 10:42
我是用先密度梯度离心,然后再裂红,CD3marker是肯定会加,但是我需要加因子活化测胞内因子,最后上机的时 ...

你这个不适用,多半是刺激的原因,我之前做的分群猜测可能是固定剂(含有固定成分的红细胞裂解液)原因,部分细胞固定不充分,导致分群,固定充分后就没有了。你可以试着看俩群细胞胞内因子的比例,有差异的话极有可能是刺激活化的原因了

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  发表于 2019-9-6 16:10
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