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[凋亡检测] 帮忙看看做的这个凋亡,补偿调不好,FITC单染没有正常细....

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发表于 2019-9-3 12:32:31 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
用PI和Annexin-FITC-做了一个精子细胞的凋亡实验,调节补偿的时候PI还可以,FITC的没有正常细胞群,两个的电压差别也很大,做出来的检测管分群也不太好,使用的是索莱宝的试剂盒。附件里是做的FCS文件,哪位高手能指点一下,补偿这块该怎么调,实验问题出在哪?

20190901.zip

643.33 KB, 下载次数: 18

发表于 2019-9-3 22:47:53 | 显示全部楼层
是否可把图直接放出来?
第一个图FSC/SSC,第二个图AV/PI
发表于 2019-9-4 07:58:35 | 显示全部楼层
calibur没法离线调补偿,建议你上机的时候慢慢调
 楼主| 发表于 2019-9-4 09:23:48 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-9-3 22:47
是否可把图直接放出来?
第一个图FSC/SSC,第二个图AV/PI

倪老师,PDF里是流式图,你帮我看一下
 楼主| 发表于 2019-9-4 09:24:58 | 显示全部楼层
hwthwt 发表于 2019-9-4 07:58
calibur没法离线调补偿,建议你上机的时候慢慢调

FITC细胞群位置差很多,动电压的话PI又显示不出来了
 楼主| 发表于 2019-9-4 09:26:26 | 显示全部楼层
小小一铁匠 发表于 2019-9-4 09:24
FITC细胞群位置差很多,动电压的话PI又显示不出来了

会不会和实验条件有关系,正常细胞群应该位置都差不多才对啊
发表于 2019-9-5 09:07:16 | 显示全部楼层
小小一铁匠 发表于 2019-9-4 09:23
倪老师,PDF里是流式图,你帮我看一下

PDF在哪里?
 楼主| 发表于 2019-9-5 15:53:34 | 显示全部楼层
倪老师,这个是流式图

流式图.pdf

195.45 KB, 下载次数: 17

 楼主| 发表于 2019-9-5 15:54:17 | 显示全部楼层

主要没搞懂同样处理,上样的时候仪器电压怎么会差那么多
发表于 2019-9-8 23:02:43 | 显示全部楼层
小小一铁匠 发表于 2019-9-5 15:54
主要没搞懂同样处理,上样的时候仪器电压怎么会差那么多

这不叫电压相差那么大。电压你不应该变动的,准确的说是FITC向右偏了,这很正常。
把补偿调好,就可以设十字门了,不需要关注其与单阳性样本的偏移。
事实上,Annexin V/PI的双染样本,没必要做单阳性参照就能直接调了。
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