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[试剂耗材] 商品化流式抗体和自己标记抗体的优缺点

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发表于 2019-9-11 12:34:44 | 显示全部楼层 |阅读模式
10流星
       发这个帖子很无奈,现在实验室要做间充质干细胞干性鉴定,使用流式细胞仪(BDAriaIII三激光十通道)对分析细胞表面marker,问题来了,公司老板说要用无标记的抗体在实验室自己标记染料,不使用已标记了染料商品化的流式抗体,理由是:a.成本低 b. 成本低 c. 成本低。而且他说染料标记抗体不难,一天就能搞定,过滤一下就能把游离染料给剔除,且没有标记上染料的抗体占比不会太大,商业化的抗体也不会纯度处理等等(我认为他是不懂装懂)。但自己对于流式抗体不是很了解,无法用充足理由反驳,所以来论坛请教一下大家,我把我想到的一些问题罗列一下,如果大家有补充也可以告诉我:
      1. 商品化的流式抗体会做纯度纯化吗?将未连上染料的抗体给剔除掉?商品化的抗体一般纯度是多少?
      2. 干细胞干性鉴定的标准,是只定性就可以,还是有的文献上指出某某抗原在95%以上,阴性在2%以下?是否需要做定量?
      3. 如果只需要定性,那是不是说明纯度不高的流式抗体也是没有问题的?只要抗体结合上抗原,在流式细胞仪检测中有荧光强度,就算是阳性且有干性?
     补充一句,因为以成本为理由,不会使用试剂盒做标记抗体,貌似就是染料和抗体孵化标记,我没有做过,所以并不清楚效率会是多少。
     请各位大神教教我 @niwanmao

发表于 2019-9-12 10:50:38 | 显示全部楼层
1、商品化抗体标记之后应该是没法做纯化的,但是游离的染料是需要去除的。每个批次的抗体浓度是不同的,大多数抗体没有标识浓度,只写TEST数量。貌似写浓度的一般都是ug/ml的级别似的。
2、干细胞鉴定,是通过抗原定性的基础上,实现细胞群的半定量(因为计算百分比,不是绝对数)。
3、抗体浓度不达标,只要能分群也行,但是往往浓度会影响分群。
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