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[功能检测] 第一次做树突体外培养,不会流式分析,求助各位如何画门

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发表于 2019-9-16 10:01:16 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
本帖最后由 blkyhsl 于 2019-9-27 13:10 编辑

MHC-Ⅱ散点图

MHC-Ⅱ散点图

MHC-2

MHC-2
2.GIF
发表于 2019-9-16 21:00:02 | 显示全部楼层
没有特异性标记,很难说在哪里啊,因为淋巴来源DC和髓系DC,位置不同,所以这些细胞群位置均可以包含。
 楼主| 发表于 2019-9-17 12:34:05 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-9-16 21:00
没有特异性标记,很难说在哪里啊,因为淋巴来源DC和髓系DC,位置不同,所以这些细胞群位置均可以包含。 ...

倪老师,我是应该再截几个什么样子的图给您看嘛,比如横轴CD11c-PE,纵轴SSC-A这样的
 楼主| 发表于 2019-9-17 12:50:48 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-9-16 21:00
没有特异性标记,很难说在哪里啊,因为淋巴来源DC和髓系DC,位置不同,所以这些细胞群位置均可以包含。 ...

老师。我又传了两张图片在楼里,是依照两个单染管互相对照画的门,还有一件事想问老师,我体外培养想要未成熟的树突,同样的条件学姐得到的树突的MHC-Ⅱ表达量总是很低,而我成熟度太高,而且树突本身量也很小,我收集的时候收集悬浮和半悬浮的,已经很小心了,树突量上不去,成熟度也下不来
发表于 2019-9-17 19:19:50 | 显示全部楼层
这两个通道存在补偿,你的补偿是否调节好了?
 楼主| 发表于 2019-9-18 14:22:33 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-9-17 19:19
这两个通道存在补偿,你的补偿是否调节好了?

唉老师我不太会补偿,每次我们都是去别的科里测,之后回来自己用flowjo大概调调,倪老师对我的未成熟树突培养方案有什么建议嘛 谢谢老师
发表于 2019-9-18 21:19:18 | 显示全部楼层
blkyhsl 发表于 2019-9-18 14:22
唉老师我不太会补偿,每次我们都是去别的科里测,之后回来自己用flowjo大概调调,倪老师对我的未成熟树突 ...

你的培养方案我没看到啊。
建议先将补偿调好之后,再分析结果吧,有结果就OK了
 楼主| 发表于 2019-9-19 09:34:58 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-9-18 21:19
你的培养方案我没看到啊。
建议先将补偿调好之后,再分析结果吧,有结果就OK了 ...

老师,我有两个问题。
一.我是在其他科里测的,拿回来只给了我源文件,可以再用flowjo重新调补偿吗?
二.CD11c表达量只有28%,MHC-Ⅱ却有70%。我想要的是树突量多一点,成熟度低一些。
培养方案如下:取大腿骨剪去两端培养基冲洗后ACK去红,清洗计数后6孔板铺板1.8^10的6次方个细胞,20ng/uL的GM-CSF和10ng/uL的IL-4,加入培养基,day2,day3,day6半量换液,day7收集悬浮和半悬浮的去检测。第七天得率能达到2.5倍到3.5倍左右,检测却总是不理想,假设像老师您说的,调节补偿,树突的量也不能上到70%吧
发表于 2019-9-19 14:17:03 | 显示全部楼层
blkyhsl 发表于 2019-9-19 09:34
老师,我有两个问题。
一.我是在其他科里测的,拿回来只给了我源文件,可以再用flowjo重新调补偿吗?
二. ...

我一直说,建议你切换到这两个抗体的散点图,看了补偿方能了解其真实比例,你现在看到的比例都可能是错的。
方法上我看不出来什么大问题。
 楼主| 发表于 2019-9-27 13:19:47 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-9-19 14:17
我一直说,建议你切换到这两个抗体的散点图,看了补偿方能了解其真实比例,你现在看到的比例都可能是错的 ...

老师,我在主楼更新了散点图,我重新做的这一次树突纯度上来了但是我发现我的MHC-Ⅱ竟然出现了三个峰,很奇怪,我有以下思考。
一:难道是我收上来的细胞其中含有其他比如巨噬细胞所以出现了不同的表达情况
二: 同样的树突里MHC-Ⅱ表达情况不同,而我只圈出10的2次方到10的3次方,大概占树突25%左右就是我要的耐受树突状细胞,就可以开展我的后续实验了。
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