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这种漂亮的抗体滴定结果图,你会做吗?跟我一步步做吧

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发表于 2019-9-18 17:45:33 | 显示全部楼层 |阅读模式

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做流式实验之前,抗体的滴定不可或缺。临床有时候或许可以凭经验,但科研中的指标,滴定这一步不建议跳过。说明书中最后一般都写着『 It is recommended that the reagent be titrated for optimal performance for each application.』

滴定的重要性和步骤,在此不多赘述,请参考既往的帖子:

在滴定的结果展示上,我们有时候看到下面这种美图:
20190918_165313.png


曾经有站友问过我,当时我还无法回答,现在我可以放心出来教大家怎么做这种滴定图了。
1、打开FlowJo软件,建立一个Group,然后将滴定的若干个FCS数据文件拖入该Group,并按照滴定浓度从阴性、低浓度、高浓度这样排列。
2、对各个滴定数据进行逐级设门,例如我们依次设置Cells-Single Cells-Live-Negative和Positive,每个数据都用同样的门模板。
3、选择Live这个节点,然后从Edit面板中点击”Select Equivalent Nodes“,可选择同组中所有相同名称的节点:
20190918_165755.png

4、在File面板,选择Export/Concatenate按钮下拉菜单Export/Concatenate Populations:
20190918_173244.png

5、在弹出的窗口中,点Concatenate面板,在Destination中选择目标路径,点开Advanced,录入后缀,最后点击Concatenate按钮,将这一组数据的Live门事件导出到一个数据文件中:
20190918_173517.png

6、导出完成后,会跳出下面这样一个对话框,你可以选择新建工作空间打开新的数据,也可以在已有的工作空间打开这个导出的新数据:
20190918_173542.png

7、最后一步就是振奋人心的时刻了,打开汇总后的新数据里面Live门事件,然后纵坐标选择IgD(本次演示的抗体名称)、横坐标选择SampleID,即可在一个散点图中展示各个滴定数据中IgD的分群变化了,一目了然看出滴定结果:


本文图片来源:UWCCC Flow Cytometry Laboratory网站
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