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[淋巴细胞亚群] 人全血淋巴细胞上连续性表达Marker(如HLA-DR)圈门问题

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发表于 2019-10-7 00:54:47 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
倪老师您好,近期流式检测人全血中淋巴细胞亚群遇到一些问题,目的是检测CD4+T中HLA-DR阳性细胞的占比,原始数据如下
1.圈淋巴细胞
1.png



2.圈CD4T
2.png



3.圈HLA-DR阳性的CD4T (共3个样本)
sample1
3.png     4.png


sample2
5.png     6.png


sample3
7.png     8.png


如图所示,为保证圈门的一致性,DR+门的位置没有移动,但明显可见:按照sample1圈得门不适用于sample2/3
请问:这样的情况该如何正确圈门?
         如果每一个样本单独圈门,能否避免样本间由于圈门导致的不一致?
         类似于DR这样连续性表达的marker,圈门时应关注散点图还是直方图?

发表于 2019-10-7 20:14:00 | 显示全部楼层
一共几色?建议用FMO设门。
 楼主| 发表于 2019-10-8 08:50:50 | 显示全部楼层
染色方案:
CD3 PE/CY7
CD4 FITC
CD8 APC
CD19 PE/CY5
HLA-DR APC/CY7
ICOS PE
胞内某分子 BV421

那每一个样本都要做一个FMO对照吗?
 楼主| 发表于 2019-10-8 08:51:13 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-10-7 20:14
一共几色?建议用FMO设门。

染色方案:
CD3 PE/CY7
CD4 FITC
CD8 APC
CD19 PE/CY5
HLA-DR APC/CY7
ICOS PE
胞内某分子 BV421

那每一个样本都要做一个FMO对照吗?
发表于 2019-10-8 20:53:49 | 显示全部楼层
kerrsun 发表于 2019-10-8 08:51
染色方案:
CD3 PE/CY7
CD4 FITC

样本性质相同,一次做一个FMO,设置HLA-DR的门。
如果你其它标记也需要设门分析比例,那么也做一个相应的FMO。
 楼主| 发表于 2019-10-8 21:27:05 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-10-8 20:53
样本性质相同,一次做一个FMO,设置HLA-DR的门。
如果你其它标记也需要设门分析比例,那么也做一个相应的 ...

倪老师,每一批样本做一个FMO的话,得到的就是一个固定的门。但这一个门在散点图上是否也难以符合每一个标本的形态呢?
(以上举例的流式图片就是同一天测的同一批样本)
发表于 2019-10-8 22:54:47 | 显示全部楼层
kerrsun 发表于 2019-10-8 21:27
倪老师,每一批样本做一个FMO的话,得到的就是一个固定的门。但这一个门在散点图上是否也难以符合每一个 ...

细胞来源相同、处理方式相同(用同一种药物或同一种刺激方式),就可以用同一个门。
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